一种高特异高敏感检测大肠杆菌O157的方法

摘要

本发明公开了一种高特异高敏感检测大肠杆菌O157的方法，包括以下步骤：步骤1）制备反应液；步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min，浑浊为阳性;步骤3）使用临床分离大肠杆菌O157菌株核酸，以及临床分离金黄色葡萄球菌以及若干临床分离头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸，进行反应，观察它们的阴阳性。本发明通过配制反应液，设计引物序列，能快速、准确的检测大肠杆菌O157，并及时采取相应的措施，减少了疾病的发生率。

主权项

一种高特异高敏感检测大肠杆菌O157的方法,其特征在于，包括以下步骤：步骤1）制备反应液反应液组成及含量为8u/ul Bst核酸聚合酶                          8u10X耐热聚合酶反应缓冲液                1X，MgSO4 2mM4M 甜菜碱                                    1M10mM d‑NTP混合液                             400μM内引物   E‑FIP                                   40umol   E‑BIP                                   40umol外引物   E‑F3                                     5umol   E‑B3                                     5umol标本核酸                                     20ng添加焦碳酸二乙酯处理水至总量达到25ul；步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30‑60min，浑浊为阳性;步骤3）使用临床分离大肠杆菌O157菌株核酸，以及临床分离金黄色葡萄球菌以及若干临床分离头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸，进行反应，观察它们的阴阳性。