一种分泌表达人Ⅲ型胶原α链蛋白的毕赤酵母工程菌及其构建方法与应用

摘要

本发明涉及一种分泌表达人Ⅲ型胶原α链蛋白的毕赤酵母工程菌及其构建方法与应用。Ⅲ型胶原蛋白可应用于生物医用材料，但未实现大规模产业化生产。本发明从人胎盘组织提取RNA,反转录建立cDNA文库，再用PCR的方法扩增出Ⅲ型胶原α链的成熟肽链基因，再将基因与毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K连接，构建质粒pPIC9K-CO3A1；将构建好的质粒pPIC9K-CO3A1线性化后导入毕赤酵母SMD1168中，经过抗性筛选，获得一株高拷贝的毕赤酵母工程菌SMD1168-CO3A1。本发明的工程菌能在胞外高效安全地分泌人Ⅲ型胶原α链蛋白，并具有较高的生物活性，该蛋白可与其他无机材料混合，作为生物可降解生物医用材料，用于组织缺损和修复等。

主权项

一种分泌表达人Ⅲ型胶原α链蛋白的毕赤酵母工程菌，其特征在于：所述的工程菌于2013年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7982。