一种原始间充质干细胞储存转运的方法

摘要

本发明公开了一种原始间充质干细胞的储存转运方法，生长处于融合状态的原始间充质干细胞收集后，用含二甲基亚砜、人脐血血清和抗生素的DMEM-F12冷冻培养基冷冻原始间充质干细胞，低温储存，在原始间充质干细胞使用前进行细胞复融，原始间充质干细胞保存液进行保存，保持固定的细胞浓度、低温运送至使用单位进行应用，此方法规范了原始间充质干细胞储存转运的流程，使原始间充质干细胞在到达使用单位之前保持在相同的活力状态，节约了时间、人力、物力、财力，经此方法储存转运的原始间充质干细胞无生物污染、无杂质污染、免疫学检查均为阴性，适合原始间充质干细胞移植应用和进行再研究。

主权项

一种原始间充质干细胞储存转运的方法，其特征在于，它是采用以下工艺方法储存转运的：将处于对数生长期、细胞生长状态处于融合阶段的间充质干细胞进行收集，向收集的细胞中缓慢加入冷冻保存液，冷冻保存液成份为DMEM‑F12，其中含二甲基亚砜5％～15％、含人脐血血清10～20%、青霉素100U/ml、链霉素100μg/ml，并使冷冻保存液与细胞充分混匀形成冷冻保存细胞悬液，将冷冻保存细胞悬液转移入冻存管中，每支冻存管内分装1～2ml冷冻保存细胞悬液，将冻存管管口密封置于装有异丙醇的冻存盒中，放置于‑70℃～‑85℃低温冰箱，等待时间大于等于5小时后将冻存管移入含有液氮的液氮罐中储存；将恒温水浴箱温度调节至37℃～41℃，从液氮中取出冻存管立即投入恒温水浴箱中轻轻晃动，直至冻存管中的固态变为液体状态；将此液态细胞悬液移至含有冷生理盐水的离心管中，混匀细胞悬液，离心收集细胞，加入细胞保存液并分装为临床应用的间充质干细胞制剂；检查细胞活率及细菌、内毒素、支原体；进行免疫学检查；将细胞浓度调节至1×10⁵～1×10⁷/ml，移入无菌管或转运袋中，使用2～8℃恒温保温箱在时间小于等于12小时内运输至使用单位，进行应用。