一种制备端粒酶多肽疫苗的方法

摘要

本发明公开了一种制备端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，包括以下步骤：1)由Fmoc-L-Lys(Boc)-OH和固相合成树脂为起始原料，反应得到Fmoc-L-Lys(Boc)-树脂；2)将Fmoc-L-Lys(Boc)-树脂采用Fmoc固相合成方法按GV1001的多肽序列顺序逐一偶联得到侧链基团保护的GV1001-树脂；3）采用裂解试剂裂解侧链基团保护的GV1001-树脂，加入沉淀试剂沉淀得到粗肽；粗肽经过纯化、冻干得到端粒酶多肽疫苗GV1001。本发明采用的制备端粒酶多肽疫苗GV1001的工艺方法具有实际的工业化应用前景和可观的经济实用价值。

主权项

一种制备端粒酶多肽疫苗GV1001的方法，包括以下步骤:1) 由Fmoc‑L‑Lys(Boc)‑OH和固相合成树脂为起始原料，反应得到Fmoc‑L‑Lys(Boc)‑树脂；2) 将体积比1:4的哌啶NMP溶液加至Fmoc‑L‑Lys(Boc)‑树脂中进行脱保护反应，产物经甲醇、NMP和/或DMF洗涤后加入混合均匀的相当于树脂担载量1.5‑10倍量的Fmoc‑L‑Pro‑OH、足以完全溶解各溶质的反应溶剂及相当于树脂担载量1.5‑10倍量的偶联剂，反应1‑10 h；反应结束后经甲醇、NMP和/或DMF洗涤产物；以其他Fmoc保护氨基酸取代Fmoc‑L‑Pro‑OH重复进行上述操作最后得到侧链基团保护的GV1001‑树脂；所述其他Fmoc保护氨基酸依次为：Fmoc‑L‑Ile‑OH、Fmoc‑L‑Phe‑OH、Fmoc‑L‑Arg(Pbf)‑OH、Fmoc‑L‑Leu‑OH、Fmoc‑L‑Arg(Pbf)‑OH、Fmoc‑L‑Ser(tBu)‑OH、Fmoc‑L‑Thr(tBu)‑OH、Fmoc‑L‑Leu‑OH、Fmoc‑L‑Leu‑OH、Fmoc‑L‑Ala‑OH、Fmoc‑L‑Pro‑OH、Fmoc‑L‑Arg(Pbf)‑OH、Fmoc‑L‑Ala‑OH、Fmoc‑L‑Glu(OtBu)‑OH；所述的偶联剂包括DCC、DIC、DBC、DCC/HOBt、DIC/HOBt、HATU/HOAt/有机碱、HBTU/HOBt/有机碱、TBTU/HOBt/有机碱或PyBOP/HOBt/有机碱；所述的有机碱为TMP、NMM或DIPEA；3) 向含侧链保护基团的GV1001‑树脂中加入体积比为90/5/3/2的TFA/thioanisole/anisole/EDT，或体积比为82.5/5/5/5/2.5的TFA/thioanisole/H2O/phenol/EDT的裂解试剂，冰浴反应0.1‑1h后，室温下继续搅拌反应1‑10h，然后抽滤，抽滤后将裂解试剂滤液利用旋转蒸发和/或N2气吹至无TFA溢出，加入沉淀试剂静置；离心分离沉淀的粗肽，粗肽经纯化、冻干得端粒酶多肽疫苗GV1001；其中：所述固相合成树脂包括但不限于CTC树脂、WANG树脂或HMPA树脂；所述端粒酶多肽疫苗GV1001的序列为：H‑L‑Glu‑L‑Ala‑L‑Arg‑L‑Pro‑L‑Ala‑L‑Leu‑L‑Leu‑L‑Thr‑L‑Ser‑L‑Arg‑L‑Leu‑L‑Arg‑L‑Phe‑L‑Ile‑L‑Pro‑L‑Lys‑OH。