广藿香多倍体的诱导方法

摘要

本发明公开了一种广藿香多倍体的诱导方法，本发明首次以广藿香愈伤组织再生的丛生芽为诱导材料，利用秋水仙素浸剂法将丛生芽的茎尖进行多倍体诱导，再将诱导后的茎尖去分化和再分化得多倍体植株。本发明的诱导材料结合所采用的诱导培养方法，显著提高了广藿香多倍体的诱导率，高达63.3%，成活率100%，以及降低了嵌合体的发生率，仅为10%。本发明获得的广藿香多倍体成稳定性好，经过无性扦插繁殖2代后，其性状仍与诱导当代相似。本发明获得的广藿香四倍体叶面积、茎等都较二倍体大许多，分枝数也更多，有利于提高广藿香油的产量，促进广藿香油品质的改善，实现广藿香优质高产的目的，满足人们对广藿香药材及其相关产品品质的需求。

主权项

一种广藿香多倍体的诱导方法，其特征在于：包括以下步骤：1）愈伤组织的诱导：取广藿香的叶片，消毒，洗净，在无菌条件下，剪成1～2cm2的小片，接种至愈伤组织培养基中培养12～14天，获得愈伤组织；2）丛生芽的诱导：在无菌条件下，将愈伤组织转接到丛生芽培养基中培养26～30天，获得丛生芽；3）秋水仙素处理：在无菌条件下，剪取0.5～1cm长的丛生芽茎尖浸泡于0.3～0.5g·L‑1的秋水仙素溶液中，黑暗条件下振荡24～72h；4）恢复培养：在无菌条件下，将秋水仙素处理后的丛生芽茎尖用无菌水洗干净，接种于愈伤组织培养基中培养12～14天后，再接种于丛生芽培养基中培养26～30天，获得多倍体丛生芽；5）增殖培养：将多倍体丛生芽接种到新的丛生芽培养基中进行增殖培养20～25天；  6）多倍体鉴定：取增殖培养后丛生芽的茎尖进行染色体数目观察，在一个根尖上同时观察到5 个以上分裂相染色体数目加倍，即可确证该变异株系为多倍体；7）生根培养：在无菌条件下，将鉴定为多倍体的株系从基部切下，转接到生根培养基中培养8～15天，获得生根苗；8）炼苗：取出生根苗，转接到装有蛭石和砂子的盆中，在室内炼苗培养28～40天；9）移苗：炼苗后，将盆苗移到室外，或者将苗从盆中移栽到田间，遮上有70～85%遮阳率的阴棚，培养8～12天后，移去阴棚，进行田间栽培管理，即可。