一种间歇补料发酵生产单葡萄醛酸基甘草次酸的方法

摘要

本发明涉及一种间歇补料发酵生产单葡萄醛酸基甘草次酸(GAMG)的方法，属于生物转化技术领域。具体方法为：首先用可诱导产生β-葡萄糖醛酸苷酶的微生物分别在种子培养基和含有甘草酸的发酵培养基中培养诱导出相应的β-葡萄糖醛酸苷酶，然后微生物利用其诱导产生的酶特异性地裂解甘草酸分子结构中的末端糖苷键，生成GAMG，并分泌到发酵液中，再多次间歇补加底物甘草酸以及无机盐。该方法通过补加底物甘草酸及无机盐，既补充了营养物质，使得菌体能够在适宜的环境下生长，又促进了目的产物的合成；发酵结束后，GAMG产量达到13～24g/L，该方法可有效提高GAMG发酵产量，延长转化周期，提高设备利用率，降低产品生产成本。

主权项

一种间歇补料发酵生产单葡萄醛酸基甘草次酸方法，其特征在于：将产紫青霉菌种接入培养基斜面上中，于34℃恒温培养7天，加入质量浓度为0.75%生理盐水洗涤菌丝体，获得孢子含量为5.2×106的孢子悬液；将产紫青霉的孢子悬液以体积比5%的接种量接入种子培养基中，32℃，170r/min培养84h，然后以1%的接种量转入二级种子培养基，32℃，170r/min培养24h，得到二级种子液；将二级种子液按照体积比10％的接种量接入到5L发酵罐中，发酵过程中控制转速为400rpm，通气比为1.0vvm，发酵温度32℃，溶氧为60～90％，pH为4.5～5.0，发酵时间54h；发酵54h后，每隔24h补加终浓度6g/L无菌底物甘草酸，发酵过程中，控制溶氧在50～90％，pH为4.5～6.0，补料四次；发酵培养9天结束后，用HPLC检测发酵液中得GAMG含量为16.44g/L，底物甘草酸转化率95.23%，得率为73.46%；经大孔树脂分离、纯化得到GAMG；所述的产紫青霉菌种为产紫青霉Li‑3。