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一种EDDP胶体金检测试剂盒的制备方法，所述EDDP胶体金检测试剂盒，包括试剂条，所述试剂条包括衬底、滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸；所述滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾衔接并固定于所述衬底上，其特征在于，所述免疫胶体金纸片上包被有胶体金标记的抗EDDP单克隆抗体，所述免疫硝酸纤维素膜上设有包被有EDDP‑牛血清白蛋白复合物的检测线和包被有羊抗鼠IgG的质控线；所述EDDP胶体金检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：1）两步还原法制备胶体金；所述两步还原法为：a.第一次还原氯金酸溶液：制备浓度为0.0004‑0.0005mol/L的HAuCl4水溶液，加热煮沸20‑30分钟，之后边搅拌边加入柠檬酸三钠水溶液，HAuCl4与柠檬酸三钠的摩尔比为1:8～9，超声振荡2‑3分钟后冷却至室温，即制得14～16nm粒径的胶体金原溶液；b.第二次还原氯金酸溶液：将第一步制得的胶体金原溶液放置于4.0℃水浴中保持温度恒定，随后按胶体金原溶液与HAuCl4水溶液体积比1：1.9～2.0加入4.0℃的0.003‑0.004mol/L HAuCl4水溶液，随后立即边搅拌边滴加4.0℃的抗坏血酸与PVP的混合水溶液，加入的抗坏血酸与本步骤加入的HAuCl4的摩尔比为25～26:1，加入的PVP与本步骤加入的HAuCl4的重量比为1:2.0～2.1，反应中保持温度恒定，搅拌至反应完全，溶液呈透明的酒红色，制得39‑42nm粒径的胶体金溶液；两步还原法中，配置各种水溶液均采用双蒸水；2）用步骤1）制备的胶体金标记抗EDDP单克隆抗体，获得胶体金标记的抗EDDP单克隆抗体；3）免疫胶体金纸片的制备：预处理玻璃纤维纸；稀释步骤2）获得的胶体金标记的抗EDDP单克隆抗体，得到免疫胶体金溶液；用所述免疫胶体金溶液包被预处理过的玻璃纤维纸，获得免疫胶体金纸片；4）将EDDP‑牛血清白蛋白复合物和羊抗鼠IgG分别喷在硝酸纤维素膜检测线和质控线的位置上，烘干备用，制得免疫硝酸纤维素膜；5）将滤样纸、免疫胶体金纸片、免疫硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在胶板上，切裁制得试剂条；6）将试剂条装入塑料盒，即获得EDDP胶体金检测试剂盒。 |
