超滤提取辣根过氧化物酶的方法

摘要

本发明属于生物分离工程与技术领域，具体是应用超滤技术从辣根中分离提取辣根过氧化物酶的方法。本发明的技术方主要包括以下步骤：（1）将辣根破碎、浸提、离心得到辣根过氧化物酶粗提液；（2）将辣根过氧化物酶粗提液用截留分子量为70kDa-100kDa的超滤膜进行超滤分离，得到辣根过氧化物酶超滤液；（3）将辣根过氧化物酶超滤液用截留分子量为1-30kDa的超滤膜进行超滤浓缩，得到辣根过氧化物酶浓缩液；（4）将辣根过氧化物酶浓缩液脱水得到辣根过氧化物酶。本发明具有操作简单、分离浓缩同步进行、产品回收率高、产品纯度达85%以上、并利于工业放大等特点，具有良好的应用前景。

主权项

一种超滤提取辣根过氧化物酶的方法，其特征在于，步骤如下：（1）取1.0kg新鲜的辣根，用蒸馏水洗净，切成5mm左右的小块，在1.5L 100mM的Tris‑HCl缓冲溶液下匀浆，用1M的HCl调匀浆液pH值为5.0；（2）将步骤（1）得到的匀浆液在4oC下充分搅拌8小时，离心取上清液1.21L；离心条件为：4oC，8000g，25min；（3）利用截留分子量为70kDa的平板式超滤膜对步骤（2）获得的1.21L上清液进行超滤分离，获得滤出液0.96L；分离条件：进口压力0.3MPa，出口压力0.2MPa，流速1.4L/h；（4）利用截留分子量为30kDa的平板式超滤膜对步骤（3）获得的0.96L滤出液进行超滤浓缩，获得截留液0.24L；分离条件：进口压力0.4MPa，出口压力0.5MPa，流速1.1L/h；（5）将步骤（4）获得0.24L截留液冷冻干燥后，得辣根过氧化物酶1.63g，经SDS‑PAGE电泳分析，辣根过氧化物酶纯度为91%。