一种获得瑟伯氏棉五个抗病相关基因cDNA全长的方法

摘要

本发明公开了一种获得瑟伯氏棉五个抗病相关基因cDNA全长的方法，包括以下步骤：培育瑟伯氏棉幼苗，制备黄萎病菌孢子悬液；培养钵中接菌诱导，取瑟伯氏棉幼根，提取RNA，合成cDNA第一链；利用瑟伯氏棉近缘物种雷蒙地棉PGIP等基因的EST序列，进行序列延伸，设计特异引物完成电子克隆；瑟伯氏棉PGIP等基因EST的PCR扩增、回收，连接在pGEM-T Easy Vector上，将PGIP等基因片段转化到感受态细胞DH5α；RACE法克隆cDNA全长，基因组DNA的PCR扩增及回收，纯化目的片段；PGIP等基因的Real Time PCR，序列分析。本发明提供了一种获得瑟伯氏棉五个抗病相关基因cDNA全长的方法，获得了瑟伯氏棉5个抗黄萎病相关基因cDNA全长，为今后克隆野生植物基因提供了一套行之有效的技术路线，具有重要的应用价值。

主权项

一种获得瑟伯氏棉五个抗病相关基因cDNA全长的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：培育瑟伯氏棉幼苗，制备黄萎病菌孢子悬液；培养钵中接菌诱导，取瑟伯氏棉幼根，提取RNA，合成cDNA第一链；利用瑟伯氏棉近缘物种雷蒙地棉PGIP基因的EST序列，进行序列延伸，设计特异引物完成电子克隆；瑟伯氏棉PGIP基因EST的PCR扩增、回收，连接在pGEM‑T Easy Vector上，将PGIP基因片段转化到感受态细胞DH5α；RACE法克隆cDNA全长，基因组DNA的PCR扩增及回收，纯化目的片段；PGIP基因的Real Time PCR，序列分析。