一种产角蛋白酶大肠杆菌基因工程菌及其应用

摘要

本发明公开了一种产角蛋白酶大肠杆菌基因工程菌及其应用，属于基因工程技术领域。本发明采用重组DNA技术将地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis BBE11-1的角蛋白酶（ker）基因克隆连接到大肠杆菌表达载体pET 22b(+)，并转化Escherichia coli BL21(DE3)，经筛选鉴定得到一株可以产较高角蛋白酶的重组枯草芽孢杆菌Escherichia coliBL21(DE3)-pET22b(+)-ker，保藏编号为CCTCC NO：M 2012180。该菌株表达的角蛋白酶酶活为256U/mL，这为角蛋白酶的大规模生产奠定了良好的基础。

主权项

一种利用基因工程菌发酵生产角蛋白酶的方法，其特征在于以产角蛋白酶基因工程菌为生产菌株，斜面活化制备种子，在种子OD600在2.5时以3%的接种量转入基本发酵培养基，于20℃、200rpm条件下培养；当OD值再为2.5时，降低发酵温度到20℃诱导30小时，IPTG浓度为0.05mM；所述种子和斜面培养基为LB培养基；所述产角蛋白酶基因工程菌，于2012年5月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2012180；所述基本发酵培养基成分为：去离子水900mL，胰蛋白胨12g，酵母抽提物24g，甘油10mL，高压灭菌，冷却至60℃，加100mL灭菌磷酸钾缓冲液。