一种油棕体细胞胚的培养方法

摘要

本发明涉及一种油棕体细胞胚的培养方法，是切取油棕母株茎干生长点上的油棕茎段，然后取油棕嫩叶修剪成片样，接种到愈伤组织诱导培养基、胚性愈伤组织培养基中进行培养得到胚性愈伤组织；将胚性愈伤组织转接到胚状体培养基中培养，每2个月继代一次，培养6～12个月后在胚性愈伤组织表面会出现白色的胚状体组织；所述胚状体培养基是以改良MS培养基为基础培养基，并添加2,4-D、水解胳蛋白、椰子水、葡萄糖、琼脂。本发明采用改良的培养基，可有效的促进油棕胚性愈伤组织诱导油棕胚状体的发生过程，得到优质的油棕胚状体，提高发生率，为油棕大规模无性繁殖提供重要的技术支撑，是一条提高油棕组培苗产量的有效途径。

主权项

一种油棕体细胞胚的培养方法，其特征在于，其步骤如下：1）、外植体的选取选取树龄8～10年的油棕母株，切取茎干生长点上15cm至95cm处的油棕茎段，经表面除杂、清洗后进行消毒处理，然后将晾干后的外植体转入超净工作台，剥除外层的老叶片，得到无菌的油棕嫩叶；2）、愈伤组织的诱导培养将油棕嫩叶修剪至大小为1cm×2cm的片样，接种到愈伤组织诱导培养基中，在温度为25～28℃，湿度为50%～65%的条件下进行暗培养，得到愈伤组织；将得到的愈伤组织转接入胚性愈伤组织培养基中，在温度为25～28℃，湿度为50%～65%的条件下暗培养，获得胚性愈伤组织；3）、体细胞胚的培养将胚性愈伤组织转接到胚状体培养基中培养，培养条件：光照强度为1500～20001x，每日光照时间为12小时，温度为25～28℃，湿度为50%～65%，每2个月继代一次；培养6～12个月后在胚性愈伤组织表面会出现白色的胚状体组织；所述胚状体培养基是以改良MS培养基为基础培养基，并添加2,4‑D 0.01～0.2mg/L、水解 酪蛋白200～2000mg/L、椰子水30～80ml/L、葡萄糖20～40g/L、琼脂7g/L；所述改良MS培养基是以MS培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整其中的肌醇、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇和烟酸的含量分别为：0.1～5mg/L、0.1～5mg/L、0.1～5mg/L、0.1～5mg/L，并添加精氨酸50～300mg/L、天冬氨酸50～300mg/L、谷氨酸50～300mg/L。