主权项 |
一种高效生产γ‑聚谷氨酸的方法,其特征在于:以地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC NO.3336为出发菌株,通过液体深层发酵制备,包括如下步骤:(1)菌种活化:将地衣芽孢杆菌CGMCC NO.3336原始菌株接种在斜面培养基上,于37℃培养16小时,如此活化2‑3次,制备成熟的斜面种子;所述斜面培养基组成为:蛋白胨10g/L,酵母粉5g/L,NaCl10g/L,琼脂20g/L,pH7.2,不足部分纯净水补足;(2)种子液的制备:将一环活化后的斜面种子接种于装有50ml液体培养基的500ml三角瓶中,37℃,220rpm培养16小时至对数生长期;所述种子培养基组成为:葡萄糖30g/L,酵母膏7g/L,胰蛋白胨10g/L,K2HPO40.5g/L,MgSO4·7H2O0.5g/L,pH7.2,不足部分纯净水补足;(3)发酵罐发酵:将步骤(2)中的种子液以10%的接种量接种于发酵罐,30L发酵罐发酵培养基装液量为15L,初始发酵温度37℃,罐压0.01‑0.05Mpa,通风量0.5‑1.0vvm,转速400‑600rpm;当发酵至24h后调节转速至200‑400rpm,通风量1.0‑1.5vvm,并开始补加流加培养基,通过pH值的反馈调节流加培养基的流加速度,控制pH值在7.4‑7.9至发酵结束前2‑6小时,总发酵时间为72h;所述发酵培养基组成为:葡萄糖80g/L,酵母膏20g/L,NH4NO34.5g/L,MgSO4·6H2O0.5g/L,NaCl10g/L,CaCl2·6H2O0.5g/L,FeSO40.01g/L,谷氨酸钠40g/L,NaNO320‑40g/L,MnSO4·H2O0.15g/L,pH值7.2‑7.5,不足部分纯净水补足;所述流加培养基组成为:葡萄糖650‑850g/L,NaCl30.0‑60.0g/L,CaCl2·6H2O10‑15.0g/L,MnSO4·H2O5‑10g/L,MgSO4·6H2O5‑20g/L,pH值7.4‑7.9,不足部分纯净水补足。 |