一种4-甲基咪唑完全抗原的合成方法

摘要

本发明公开了一种4-甲基咪唑完全抗原的合成方法。本发明将4-甲基咪唑与有机酸混合后，溶解于溶剂中，有机酸为乙醛酸、丙醛酸、丁醛酸、戊醛酸、己醛酸或对醛基苯甲酸，配成4-甲基咪唑的质量浓度为0.01g/mL~0.5g/mL，且有机酸的质量浓度为0.05g/L~5g/mL的混合溶液，反应得到4-甲基咪唑半抗原；然后在1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的活化作用下，使4-甲基咪唑半抗原与蛋白结合，制备4-甲基咪唑完全抗原。本发明成功合成了4-甲基咪唑的人工抗原，合成步骤简洁，有效，可用于食品及药品中4-甲基咪唑的快速检测，并为后续产品的研究、开发及应用提供必需的人工抗原。

主权项

一种4‑甲基咪唑完全抗原的合成方法，其特征在于包括如下步骤：（1）半抗原的制备：将4‐甲基咪唑与有机酸混合后，溶解于溶剂中，配成4‐甲基咪唑的质量浓度为0.01g/mL～0.5g/mL，且有机酸的质量浓度为0.05g/L～5g/mL的混合溶液，在0℃～70℃条件下反应0.1h～24h，得到4‐甲基咪唑半抗原；所述有机酸为乙醛酸、丙醛酸、丁醛酸、戊醛酸、己醛酸或对醛基苯甲酸；所述溶剂为水、甲醇、乙醇、DMSO或DMF；（2）半抗原的活化：将4‐甲基咪唑半抗原溶于DMSO或DMF中，得到浓度为0.001～0.5g/mL的4‐甲基咪唑半抗原溶液，在搅拌条件下加入EDC和NHS，使EDC和NHS在DMSO或DMF溶液中的质量浓度为0.001～0.5g/mL，活化0.1～12h；（3）偶联蛋白溶液的制备：将牛血清白蛋白或卵清白蛋白溶解于磷酸盐缓冲液中，配成偶联蛋白浓度为0.001g/mL～0.5g/mL的蛋白溶液；（4）人工抗原的合成：在搅拌条件下，蛋白溶液加入活化后的半抗原溶液中，在温度为0℃～30℃条件下反应0.5h～12h，得到人工抗原混合液；（5）透析：将人工抗原混合液转移到能透过分子量为1kDa～100kDa的透析袋中，在搅拌的条件下，使用磷酸盐缓冲液透析1天～8天；透析结束后，干燥，得到固体状的4‑甲基咪唑完全抗原。