一种检测基因序列的方法

摘要

本发明涉及生物基因工程领域，提供了一种检测基因序列的方法。所述方法，包括以下步骤：将第一锚定引物锚定结合于含基因序列的待测核酸片段的第一接头上，使用连接测序法读取第一锚定引物延伸末端后的M个核苷酸的序列信息；利用内切酶将已读取序列信息的核苷酸部分或完全切除，并在酶切产物上连接第二接头，得新的待测核酸片段；然后在新的待测核酸片段的第二接头上锚定第二锚定引物，再利用连接测序法读取第二锚定引物延伸末端后N个核苷酸的序列信息；更换试剂，重复上述酶切、接头连接、锚定引物结合、连接测序等步骤，得所需的基因序列信息；本发明通过酶切延伸测序方法实现了增加检测基因序列的测序读长的目的。

主权项

一种检测基因序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：A.将第一锚定引物锚定结合于含基因序列的待测核酸片段的第一接头上；B.在第一锚定引物延伸末端分别连接带不同位置标记的荧光探针，并检测相应的连接产物的荧光信号，得到第一锚定引物延伸末端后M个核苷酸的序列信息；C.利用内切酶将步骤B中已得到序列信息的核苷酸部分或完全切除，得到带有含有待测序片段的酶切产物；D.酶切产物连接第二接头得到新的含基因序列的待测核酸片段，将第二锚定引物结合于新的含基因序列的待测核酸片段的第二接头上；E.在第二锚定引物延伸末端分别连接带不同位置标记的荧光探针，并检测相应的连接产物的荧光信号，得到第二锚定引物延伸末端后N个核苷酸的序列信息；F.更换试剂，对前一步骤的产物进行酶切、接头连接、锚定引物结合、荧光探针连接和荧光信号检测；G.重复步骤F，直至得到含基因序列的待测核酸片段中所需的基因序列信息；其中，M、N均为正整数；所述基因为等位基因或抗肿瘤药物相关基因；所述抗肿瘤药物相关基因包括CYP2C9、VKORC1、KIT、PDGFRA、CYP2C19、DHFR、GSTM1、RFC1、CYP19A1、UGT1A1、UGT1A7、UGT1A9、ABCB1、CYP2D6、CYP3A5、SULT1A1、UGT2B15、GSTA1、SOD2、CYP2B6、GSTP1、MDR1、BCRP、p53、CAT、CBR1、CBR3、EGFR、KRAS、BRAF中的至少一个。