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一种纯化腈水解酶的方法，其特征在于具体方法步骤如下：(1)制备预处理液以市售的粗腈水解酶为原料，按照粗腈水解酶的质量∶缓冲溶液的体积比为1g∶80～120mL的比例，先将粗腈水解酶加入到缓冲溶液中，搅拌混合均匀后，再搅拌溶解20～30分钟，然后将溶解液泵入真空抽滤机中，进行真空抽滤，分别收集抽滤滤过液和抽滤渣，其中，缓冲溶液为pH 8.0的硼砂‑氯化钙缓冲溶液或pH 9.0的硼砂‑氯化钾缓冲溶液或pH 9.18的硼砂‑水缓冲溶液；(2)制备超滤液第(1)步完成后，将第(1)步收集的抽滤滤过液泵入截留分子量为50～60KDa的超滤器中，在0.05～0.2MPa下，进行第一次超滤分离，直到第一次超滤截留液的体积减少至原体积的8～12％为止，分别收集第一次超滤滤过液和第一次超滤截留液，在收集的第一次超滤截留液，加入去离子水，补充至原体积，在0.05～0.2MPa下，再进行第二次超滤分离，直到第二次超滤截留液体积减少至原体积的8～12％为止，分别收集第二次超滤液和第二次超滤截留液，并合并第一次超滤滤过液和第二次超滤滤过液；(3)制备纳滤浓缩液第(2)步完成后，将第(2)步合并的第一、二次超滤滤过液泵入截留分子量为400～600Da的纳滤器中，再在0.2～0.4MPa下，进行纳滤分离，直至第一次纳滤截留液的体积减少至原体积的30～40％时为止，分别收集纳滤滤过液和纳滤截留液，在收集的纳滤截留液中，加入去离子水补充至原体积，在0.2～0.4MPa下，再进行第二次纳滤分离，直到第二次纳滤截留液的体积减少至原体积的15～25％为止，分别收集第二次纳滤滤过液和第二次纳滤截留液；(4)制备纯化腈水解酶冻干粉第(3)步完成后，按照0.3～0.8％蔗糖溶液∶第(3)步收集的第二次纳滤截留液的体积比为1∶25～50的比例，先将蔗糖溶液加入到第二次纳滤截留液中，搅拌均匀后，再放置于‑16～‑20℃温度下，预冻3～6小时，接着再放置于冷冻干燥机中，在30～60Pa真空度、‑50～‑60℃温度下，进行冷冻干燥24～36小时。 |
