气相色谱-质谱检测发酵液中氨基酸的方法

摘要

本发明涉及一种气相色谱-质谱检测发酵液中氨基酸的方法，属于生物化学检验测定技术领域。本发明检测方法步骤包括：（1）取发酵液，高速离心，分别收集细胞和细胞外液；（2）发酵液样品制备：取步骤1）得到的上清液加入乙腈除去蛋白，涡旋振荡，再离心收集上清液Ⅲ，加入内标物核糖醇溶液，室温真空烘干，得到细胞外液样品Ⅱ；（3）样品衍生，加入糖衍生剂、氨基酸衍生剂；（4）气相色谱-质谱分析和数据采集。本发明具有样品处理简单，操作简便，检测氨基酸时间短，灵敏度高，检测结果重复性高，可实现多个样品制备等优点。

主权项

一种气相色谱‑质谱检测发酵液中氨基酸的方法，其特征在于，检测方法步骤包括：（1）取发酵液，高速离心，分别收集菌体和上清液Ⅰ；（2）发酵液样品制备：取60~350ul步骤1）得到的上清液Ⅰ，在清液Ⅰ中加入乙腈除去蛋白，上清液Ⅰ与乙腈体积比为1:0.5~1.5，涡旋振荡，再离心收集上清液Ⅲ，加入内标物核糖醇溶液，上清液Ⅲ体积与内标物核糖醇重量比例为50~300ul：20μg，室温真空烘干，得到细胞外液样品Ⅱ；（3）样品衍生：在步骤2）得到的样品Ⅱ中，分别加入50~150ul糖衍生剂，恒温放置1.5~4h，再分别加入50~150ul氨基酸衍生剂，恒温放置过夜，衍生完毕，离心衍生后的样品Ⅱ，收集上清得到待测胞内样品Ⅱ；（4）利用气相色谱‑质谱对步骤3）得到的待测胞内样品Ⅱ，进行分析和数据采集。