切割来自HPRT基因的DNA靶序列的大范围核酸酶变体及其用途

摘要

本发明涉及一种I-CreI变体或单链衍生物，其在LAGLIDADG核心结构域的位于I-CreI中26到40位以及44到77位的两个功能性亚结构域之一中含有至少一个替换，并且所述I-CreI变体或单链衍生物能够切割来自HPRT基因的具有核苷酸序列SEQ ID NO：1到14的DNA靶序列。本发明还涉及所述变体为治疗目的(自毁容貌综合征的基因治疗)或非治疗目的(改造转基因动物和重组细胞系)用于在HPRT基因中诱导位点特异性修饰的用途。

主权项

I‑CreI变体，其为由第一和第二I‑CreI单体组成的异二聚体，其中所述两个I‑CreI单体中至少一个单体在LAGLIDADG核心结构域的位于I‑CreI氨基酸序列SEQ ID NO：143或144中26到40位的第一功能性亚结构域第26、28、30、32、33、38和/或40位中具有至少一个第一替换，以及在LAGLIDADG核心结构域的位于所述I‑CreI氨基酸序列44到77位的第二功能性亚结构域第44、68、70、75和/或77位中含有至少一个第二替换，其中所述第一和第二I‑CreI单体选自以下序列对：SEQ ID NO：32与52，SEQ ID NO：32与53，SEQ ID NO：32与54，SEQ ID NO：32与55，SEQ ID NO：32与56，SEQ ID NO：32与57，SEQ ID NO：32与58，SEQ ID NO：32与60，SEQ ID NO：32与65，SEQ ID NO：32与66，SEQ ID NO：32与67，SEQ ID NO：32与68，SEQ ID NO：32与69，SEQ ID NO：32与70，SEQ ID NO：32与71，SEQ ID NO：32与72，SEQ ID NO：32与73，SEQ ID NO：32与74，SEQ ID NO：75与56，SEQ ID NO：76与56，SEQ ID NO：77与56，SEQ ID NO：78与56，SEQ ID NO：79与56，SEQ ID NO：80与56，SEQ ID NO：81与56，SEQ ID NO：82与56，SEQ ID NO：147与148，并且其中所述I‑CreI变体能够切割来自HPRT基因的序列SEQ ID NO：4的DNA靶序列。