一种伊氏杀线真菌生产工艺及其制剂和生产装置

摘要

本发明公开了一种伊氏杀线真菌生产工艺及其制剂和生产装置，生产工艺采用液固双相培养方法进行伊氏杀线真菌的大量生产，通过液体发酵可以先获得大量的菌丝体、芽生孢子及少量的分生孢子，再转到固体培养基上使其产生大量的气生分生孢子，经本工艺可最终制得伊氏杀线真菌的丸剂或粉剂以便于储存，使用时在0.1M柠檬酸钠溶液中溶解或加水稀释即可；生产装置包括一盘体，盘体的底盘上打有若干孔，至少有一层可将所有孔罩住的金属网固定在底盘上，该装置保证了伊氏杀线真菌固体培养所需要的氧气、湿度，又有效地防止了杂菌污染，大大提高了伊氏杀线真菌的产孢量。

主权项

一种伊氏杀线真菌的生产工艺，包括有预先得到的伊氏杀线真菌菌落，其特征在于方法步骤如下：a）预处理：将操作间、超净工作台和发酵箱打扫干净并灭菌处理；b）制备伊氏杀线真菌菌种:按如下组份及重量百分比配料：马铃薯10‑30%，葡萄糖1‑3%，麦麸0.25‑1%，水66‑88.75%，将配好的料放入培养容器内，常规高温高压灭菌至少20分钟，冷却后接入伊氏杀线真菌菌落，置摇床上培养72‑84小时，其中，设定环境温度为25‑28度，摇床转速为150‑180转/分钟；c）按如下组份及重量百分比制备液体培养基：蛋白胨1‑3%，葡萄糖1.5‑3.5%，酵母粉0.3‑1.5%，消泡剂0.03‑0.15%，水91.85‑97.17%；将全部的液体培养基加入到发酵罐中采用常规高温高压定时灭菌，将前期步骤a培养的伊氏杀线真菌菌种经接种口完全接入发酵罐内，然后盖严发酵罐接种口的盖子；共培养72‑96小时；d）按如下组份及重量百分比制备固体培养基：麦麸15‑30%，松木屑10‑30%，水40‑75%；将制备得的的固体培养基按定量分成若干份，一份定量的固体培养基装入一个纱布袋中，将袋口封好，使固体培养基在袋中呈松散状，再用纸将纱布袋包好，放在底部带孔的不锈钢盘中，再将一个同样的不锈钢盘反扣在装有固体培养基纱布袋的盘子上，放入灭菌锅，在121.3℃的温度及1.05kg/cm2的压力下，维持至少60分钟；将固体发酵盘及固体培养基接种用具均灭菌处理；灭好菌的固体培养基和所有器具直接放入超净工作台，冷却至30度以下，期间紫外灯、鼓风开启；e）将步骤c制备的液体培养基培养的菌液分步从发酵罐中移出至若干个已灭菌的分装容器内，各分装容器内盛有一份设定定量的菌液，分装过 程中保持洁净，每完成一份分装即刻封口；f）取步骤d制备的1袋固体培养基倒入搅拌锅中，用搅拌器打散，加入步骤e中的1个分装容器内的全部菌液，搅拌均匀，分别分装到若干固体发酵盘中，各固体发酵盘采用保鲜膜铺底，每盘装有900～1100克的前述固体带菌培养基初混物，用保鲜膜将发酵盘口封好，放入温度为23‑26度的发酵箱，每箱中放置10～20个发酵盘，培养7‑10天；g）将培养完毕的固体带菌培养基整理成松散状，分别装入若干尼龙纱袋中，放入洗涤器中，加入10倍水，洗涤、过滤，滤液进入收集池后，启动离心机离心处理；最终取出沉淀，收于低温冰箱中，得到伊氏杀线真菌制剂半成品。