海参组织蛋白质组的提取方法

摘要

本发明所公开的海参组织蛋白质组的提取方法，利用液氮研磨、超声处理、超高速低温离心及蛋白质组样品纯化等一系列步骤，能够从海参组织中获得种类全面、浓度及纯度均较高的蛋白质组，其最终产物尤其适合于进行蛋白质双向电泳、高效液相层析（HPLC）以及蛋白质组质谱鉴定等蛋白质组学研究，对开展海参蛋白质组学的相关研究具有较为重大的意义；它可以为海参的苗种优选、养殖技术提高以及病害防控提供理论基础和实践指导，有助于解决海参种质退化、病害频发等实际生产问题，有利于提高海参产业的经济效益和社会效益。

主权项

一种海参组织蛋白质组的提取方法，其特征在于：所述的方法按照以下步骤进行：a. 取海参组织用4℃、pH=6.8的50mM Tris‑HCL清洗3‑5次，然后将海参组织粉碎后放入研钵中，一边研磨一边向研钵中添加液氮，直至海参组织碎块呈固态的粉末状，b. 将海参组织粉末放置到超声管中，并按照液料比为200μl：0.1g的比例向超声管中加入pH=6.8的50mM Tris‑HCL的缓冲液，在4℃的条件下进行超声处理，超声处理过程中工作时间4s，间歇时间10s，循环30次，然后在8000g、4℃的条件下离心处理20min，取上清液和沉淀物，其中上清液即为海参组织可溶性全蛋白溶液，c. 将b步骤中获得的沉淀物放入超声管中，并向超声管中添加50mM Tris‑HCL、1mM EGTA、1mM PMSF，pH=7.4的缓冲液，在4℃的条件下进行超声处理，超声处理过程中工作时间4s，间歇时间10s，循环30次，然后在23000g、4℃的条件下离心处理1h，取上清液，将上清液在150000g、4℃的条件下离心处理1h，弃上清液，向余下的溶液中加入终浓度为2%的Triton X 114，在4℃的条件下搅拌处理1h，再在150000g、4℃的条件下离心处理1h，去除不溶物，在37℃的条件下水浴20min，之后在1000g、4℃的条件下离心处理20min，取下层溶液，该下层溶液即为海参组织细胞膜蛋白的提取液，d. 将b步骤中获得的海参组织可溶性全蛋白溶液和c步骤中获得的海参组织细胞膜蛋白的提取液合并后，与‑20℃的丙酮按照1:5的比例混合，在‑20℃的条件下静置12‑20h，然后将混合溶液在8000g的条件下离心处理30min，去除上清液，将沉淀取出在4℃的环境下干燥，干燥后的产物即为含有海参组织可溶性全蛋白和海参组织细胞膜蛋白的海参组织蛋白质组。