禽流感病毒RT-PCR ELISA试剂盒

摘要

本发明提供了根据流感病毒保守的M基因设计了特异性引物，借助生物素与链霉亲和素特异性结合的原理，使生物素标记的PCR产物结合到酶标板上，之后加入抗地高辛的过氧化物酶，最后加TMB显色液，阳性产物即可显色；在此基础上本发明成功研制了专用试剂盒。该方法将PCR和高灵敏度的地高辛检测系统相结合，敏感性比常规琼脂糖凝胶电泳检测方法高l00倍以上，而且特异性强，克服了组织样品中AIV含量少而难以检测的困难，与病毒分离方法相比符合率可达95%以上，且排除了化学试剂(如溴化乙锭)的污染，有利于自动化，适于大量样本的检测，为禽流感的早期诊断和分子流行病学调查提供了一条新途径。

主权项

一种禽流感病毒试剂盒，其特征在于：该试剂盒中包括：上游引物M1和下游引物M2，其中所用的上游引物M1其序列如Seq ID No:1所示，采用生物素标记后：5’BIOTIN‑TTCTAACCGAGGTCGAAAC‑3’，下游引物M2其序列如Seq ID No:2所示，采用地高辛标记后：5’DIG‑AAGCGTCTACGCTGCAGTCC‑3’，链霉亲和素包被酶标板，Anti‑Digoxigenin‑POD溶液，TMB底物和终止液；该试剂盒应用的具体方法如下：首先根据流感病毒保守的M基因设计特异性引物：上游引物M1和下游引物M2；再用特异性的引物扩增出保守片段，然后用链霉亲和素包被酶标板，借助生物素与链霉亲和素特异性结合的原理，使生物素标记的PCR产物结合到酶标板上，之后加入抗地高辛的过氧化物酶，最后加TMB显色液，阳性产物即可显色；上下游引物的浓度均为20pmol/μL，预期扩增产物长度229bp。