一种脂肪细胞体外培养方法

摘要

本发明公开了一种脂肪细胞体外培养方法。本发明将脂肪组织先匀浆处理成乳糜状，然后用改进的接种环将乳糜组织在培养瓶底壁均匀涂片，之后翻转培养瓶加入含牛磺酸的培养液，平放入培养箱，30-40分钟后将培养瓶翻转，让培养液进入培养瓶底壁的涂片中继续培养，24-36小时后细胞贴壁生长，4-5天后有约80-90%细胞贴壁。本发明培养方法与胶原酶消化法相比，操作步骤简单，花费时间短，通常不会造成培养污染，而且由于不受胶原酶消化的影响，细胞活性较高，贴壁后生长状态良好；与组织块培养法相比，细胞培养周期大大缩短，而且细胞生长均匀。

主权项

一种脂肪细胞的体外培养方法，其特征是， （1）脂肪组织的匀浆处理在无菌超净台内首先将脂肪组织放在平皿中修剪成0.8‑1.2cm3的块状，然后用PBS缓冲液冲洗3‑5遍，之后把组织块放在干燥的平皿内沾3‑5下，再放入组织匀浆机的无菌试管内180‑200转/分钟匀浆处理3‑5分钟，使组织块成乳糜状；（2）脂肪细胞培养用吸管吸取乳糜状组织放在培养瓶底壁，然后用接种环将组织在培养瓶底壁上均匀涂片，涂片厚度为0.10‑0.15毫米，之后将剩余乳糜状组织用接种环推到瓶口处，吸管吸出；然后翻转培养瓶加入含牛磺酸的培养液，平放入培养箱中，30‑40分钟后将培养瓶再次翻转，让培养液慢慢进入培养瓶底壁的涂片中，并重新放回培养箱继续培养。