发明名称 β-内酰胺抗生素合成酶的高通量筛选方法
摘要 本发明公开了一种β-内酰胺抗生素合成用酶的高通量筛选方法,它按以下步骤进行:在酶标板的板孔中加入合成液,然后加入待测酶样品,在微孔板振荡反应器中,10-30℃,反应0.1-3小时,反应过程中每隔1-30分钟取出酶标板加入PDAB显色液显色,酶标测定其在415nm处的吸光值大小;根据吸光值变化趋势及吸光值的最低值,筛选出活性高、合成能力好的酶;所述合成液是将β-内酰胺抗生素的母核与侧链溶解于KPB溶液中制成;所述待测酶样品为β-内酰胺抗生素合成酶。本发明可以用于用于内酰胺类抗生素如阿莫西林、头孢氨苄、头孢克洛、头孢羟氨苄、氨苄西林等酶法合成用酶的筛选。具有操作简单、成本低廉、检测准确等特点,适合大规模高通量筛选合成用酶。
申请公布号 CN103667418A 申请公布日期 2014.03.26
申请号 CN201310696643.X 申请日期 2013.12.18
申请人 华北制药河北华民药业有限责任公司 发明人 刘力强;贾娟娟;牛昆;范俊辉;石晨光;王召业;吕娜;武芳;王欢;杨丽萍;邸胜苗;刘东
分类号 C12Q1/34(2006.01)I 主分类号 C12Q1/34(2006.01)I
代理机构 石家庄国域专利商标事务所有限公司 13112 代理人 白海静
主权项 一种β‑内酰胺抗生素合成用酶的高通量筛选方法,其特征在于它按以下步骤进行:在酶标板的板孔中加入合成液,然后加入待测酶样品,放入微孔板振荡反应器中,10‑30℃,反应0.1‑3小时,反应过程中每隔1‑30分钟取出酶标板加入PDAB显色液显色,酶标测定其在415nm处的吸光值大小;根据吸光值变化趋势及吸光值的最低值,筛选出吸光值较早到达最低值且吸光值最低值较低的酶,即为活性高、合成能力好的酶;所述合成液是:将母核与侧链溶解于KPB溶液中制成合成液,备用;所述的母核为6‑APA、7‑ADCA、7‑ACCA、7‑ACA和7‑AVCA中的任意一种,所述的侧链为HPGME·HCL或PGME·HCL;所述待测酶样品为β‑内酰胺抗生素合成酶。
地址 052165 河北省石家庄市良村经济技术开发区海南路98号