一种用于抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的1010shRNA及其制备方法

摘要

一种用于抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的1010shRNA，所述包含siRNA序列、shRNA慢病毒表达载体构建、复制缺陷型慢病毒的获得、慢病毒感染Marc-145细胞（绿猴肾细胞）以及抑制PRRSV复制效果的验证方法，该序列具有明显抑制PRRSV在敏感细胞上复制的作用。本发明对PRRSV体内外复制进行RNA干扰的探索，构建靶向PRRSV基因组的特定保守基因区段的慢病毒载体介导的稳定整合的RNA干扰技术，有望构建靶向猪繁殖与呼吸综合征病毒的siRNA的转基因动物。为RNAi应用于猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因功能研究以及猪繁殖与呼吸综合征的防治积累了实验数据，为动物的抗病育种提供前期准备。

主权项

一种用于抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的1010 shRNA，其特征在于通过构建1010shRNA慢病毒表达载体，获得复制缺陷型慢病毒，以获得的慢病毒感染Marc‑145细胞，筛选表达1010shRNA的Marc‑145细胞克隆并验证其对PRRSV的抑制效果；所述具有抑制效果的1010shRNA序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，包括：1010: 5’→3’SEQ ID NO.1：T CACCGGACAATACTTGGCACCAATACGAATATTGGTGGCAAGTATTGTCCSEQ ID NO.2：B AAAAGGACAATACTTGGCACCAATATTCG               TATTGGTGCCAGTATTGTCC。