一种用高效液相色谱法测定恩替卡韦片中全反式异构体的方法

摘要

本发明涉及一种用液相色谱法分离测定恩替卡韦及其全反式异构体的方法,该方法以多糖涂敷型色谱柱,以异丙醇-无水乙醇-三氟乙酸溶液为流动相,异丙醇-无水乙醇-三氟乙酸体积比为500∶500∶1,可以定量测定恩替卡韦的全反式异构体含量,从而有效控制药品质量。

主权项

一种用高效液相色谱法测定恩替卡韦片中全反式异构体的方法，其特征在于，包括如下步骤:（1）系统适用性溶液制备步骤称取恩替卡韦全反式异构体3.0mg,置50mL棕色量瓶中，加无水乙醇40mL，超声使溶解，放冷，无水乙醇稀释至刻度，摇匀作为恩替卡韦全反式异构体储备液；（2）系统适用性溶液制备步骤称取恩替卡韦标准品约6.0mg，置50mL棕色量瓶中，加无水乙醇约40mL，超声使溶解，放冷，精密量取步骤（1）制备的恩替卡韦全反式异构体储备液1.0mL加入，加无水乙醇稀释至刻度，混匀，作为系统适用性溶液；（3）供试品溶液制备步骤将恩替卡韦片研成细粉，精密称取细粉适量，将细粉完全转移至量瓶中，加无水乙醇使溶解并定容，滤过，取续滤液制成每1mL约含恩替卡韦0.15mg的溶液，摇匀，滤过，作为供试品溶液；（4）对照品溶液制备步骤将步骤（1）制备的供试品溶液离心，从离心后的供试品溶液上清液中精密量取1.0mL到100mL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得质量百分比浓度为1.0%的对照品溶液；（5）流动相制备步骤将无水乙醇500ml和500ml异丙醇，加入1ml三氟乙酸，混匀，超声30分钟，即得；（6）色谱系统建立步骤色谱柱：多糖涂敷型色谱柱250*4.6mm，柱温：30℃，检测器：紫外检测器，250nm，流速：1.0ml/min，进样体积:20μl；（7）洗脱步骤等度洗脱（8）分析过程步骤照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录ⅤD）测定；精密量取系统适用性溶液20μl注入液相色谱仪中，出峰前后顺序为异构体和恩替卡韦，异构体和主峰的分离度应不小于2.0；精密量取对照品溶液20μl注入符合系统适用性要求的液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%。再精密量取20μl的空白溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；（9）计算步骤依据步骤（8）记录的色谱图，用主成分自身对照法计算恩替卡韦片中全反式异构体，即得；具体计算公式如下： % impurity A = A spl A std 注：Aspl=样品溶液中异构体峰面积；Astd=1%自身对照溶液主峰峰面积。