一种缓解铅毒性的富硒米肽酶解制备方法

摘要

本发明属于富硒稻米深加工领域，涉及一种缓解铅毒性的富硒米肽酶解制备方法。本发明利用新鲜富硒稻米为原料，将原料磨粉、过筛、脱脂后过夜风干，以碱法提取蛋白质，酸沉后水洗冻干，制成富硒米蛋白。富硒米蛋白经酶解、灭酶活后所得多肽冻干保存，即得本发明产品。本发明的富硒米肽在细胞实验中，能拮抗铅对细胞的毒性作用，明显提高铅中毒细胞的存活率和受试物的半数致死量(IC50值)。本发明所得的富硒米肽具有缓解铅对细胞毒性的作用，制备方法简单、易行，可应用于功能食品的研制和开发。

主权项

一种缓解铅对小鼠巨噬细胞RAW264.7毒性的富硒米肽的酶解制备方法，其特征在于包括以下制备步骤和工艺条件：(1)原料预处理：选取新鲜富硒稻米为原料，磨成粉末后过80目筛；(2)脱脂：将富硒稻米样品按照料液比1∶4～1∶6配比后，借助磁力搅拌器(JB‑5，金坛市精达仪器制造有限公司)浸提脱脂两次，每次3～4h，4500g离心15min，收集沉淀，置于电热鼓风干燥箱(DHG‑9030A，上海一恒科技有限公司)，35℃下通风2h至干燥；(3)碱法提取蛋白质：将干燥后的富硒米粉按照料液比1∶15～1∶20与浓度为0.02～0.07mol／L的NaOH溶液配比后，搅拌均匀，设置温度35～40℃，于恒温振荡器(SHA‑B，金坛市荣华仪器制造有限公司)上提取2.5～3h，4500g离心15min，收集上清液，重复此法碱提2～3次，合并上清液；(4)酸沉：用0.01～0.02mol／L的HCl溶液调(3)中蛋白液pH至等电点(4.8)，待大量蛋白质沉淀析出后，4500g离心15min，收集沉淀；(5)水洗：将上述沉淀用去离子水按照料液比1∶10～1∶20洗涤后，4500g离心15min，弃去上清液，重复水洗2～3次；(6)冻干：将(5)所得富硒米蛋白分装入培养皿，表面用保鲜膜包裹，在‑20℃冰箱中预冻12～15h，取出放入真空冷冻干燥机(Lg‑5A，上海离心机械研究所)24h，将所得富硒米蛋白保存于‑4℃冰箱备用；(7)酶解：将(6)中所述富硒米蛋白制成底物浓度3％～5％的悬浊液，按照酶比底物浓度8％～12％加入胰蛋白酶，用0.05mol／LNaOH调节体系pH至8.0～9.0附近，置磁力搅拌器(JB‑5，金坛市精达仪器制造有限公司)搅拌的同时，控制温度45～50℃水浴3.5～4h；(8)灭酶活：升温至90～95℃，保持10～15min，将胰蛋白酶灭活；(9)冻干：待(8)所得富硒米肽悬浊液冷却后分装入培养皿，表面用保鲜膜包裹，在‑20℃冰箱中预冻12～15h，取出放入冷冻干燥机(Lg‑5A，上海离心机 械研究所)24h，将所得富硒米肽产品保存于‑4℃冰箱备用。