发明名称 |
气相色谱-质谱检测细胞内中糖、氨基酸的方法 |
摘要 |
本发明涉及一种气相色谱-质谱检测细胞内糖、氨基酸的方法,属于生物化学检验测定技术领域。本发明检测方法步骤包括:(1)取发酵液,高速离心,分别收集细胞和细胞外液;(2)细胞内代谢物样品制备,将收集的菌体用生理盐水清洗,冷甲醇溶解后超声破碎,低温萃取,离心收集萃取上清液,加入内标物,低温真空烘干;(3)样品衍生,加入糖衍生剂、氨基酸衍生剂;(4)气相色谱-质谱分析和数据采集。本发明具有样品处理简单,操作简便,检测糖、氨基酸时间短,灵敏度高,检测结果重复性高,可实现多个样品制备等优点。 |
申请公布号 |
CN103675180A |
申请公布日期 |
2014.03.26 |
申请号 |
CN201310649126.7 |
申请日期 |
2013.12.05 |
申请人 |
陈东 |
发明人 |
陈东 |
分类号 |
G01N30/88(2006.01)I;G01N30/06(2006.01)I |
主分类号 |
G01N30/88(2006.01)I |
代理机构 |
广西南宁汇博专利代理有限公司 45114 |
代理人 |
邓晓安 |
主权项 |
一种气相色谱‑质谱检测细胞内糖、氨基酸的方法,其特征在于,检测方法步骤包括:(1)取发酵液,高速离心,分别收集菌体和上清液Ⅰ;(2)细胞内代谢物样品制备:取步骤1)得到的菌体,用生理盐水清洗2~3次,冷甲醇溶解后超声破碎至细胞裂解,得到裂解液,低温萃取裂解液,离心收集50~200ul萃取后裂解上清液Ⅱ,加入内标物核糖醇溶液,裂解上清液Ⅱ体积与内标物核糖醇重量比例为50~200ul:20μg,室温真空烘干,得到细胞内代谢物样品Ⅰ;(3)样品衍生:在步骤2)得到的样品Ⅰ中,分别加入50~150ul糖衍生剂,恒温放置1.5~4h,再分别加入50~150ul氨基酸衍生剂,恒温放置过夜,衍生完毕,离心衍生后的样品Ⅰ,收集上清得到待测胞内样品Ⅰ;(4)利用气相色谱‑质谱对步骤3)得到的待测胞内样品Ⅰ,进行分析和数据采集。 |
地址 |
530004 广西壮族自治区南宁市高新区滨河路1号中谷蓝枫枫林阁 |