感染中四小麦条锈菌新菌系T4的快速分子检测方法

摘要

本发明公开了一种感染“中四”小麦条锈菌新毒性菌系T4的快速分子检测方法，利用189条RAPD随机引物在新菌系T4和我国小麦条锈菌流行菌系CYR29、CYR31、CYR32、CYR33、Su11-4以及感染抗条锈病基因Yr26的新菌系V26之间筛选，得到两个T4的特异性RAPD标记S1311和S1363，将特异性条带经过回收、纯化、克隆、测序后，根据测序结果，设计SCAR引物，成功地将RAPD标记转化为稳定的SCAR标记T4SP8-1/T4SP8-2（序列为5′GGGCGTGGATGAAGAG3′/5′GGAGCAGAAGCAGGTTT3′）。该标记可以在700bp处稳定的扩增出新菌系T4的特异性条带。利用本发明开发的新菌系T4的特异性SCAR标记T4SP8-1/T4SP8-2可以实现大田中T4新菌系的早期快速分子检测，了解病菌的变异动态，为监测该菌系及小麦条锈病的防治决策提供可靠的技术保障和理论依据。

主权项

小麦条锈菌新毒性菌系T4的特异性RAPD标记的筛选和特异性引物的设计，其特征在于：根据小麦条锈菌新菌系T4 DNA序列的特性，筛选到两个特异性RAPD标记S1311（5′ CTGCCACGAG  3′）和S1363（5′  GGCTGTGTGG 3′），利用这两个引物能稳定的扩增出条锈菌T4的特异性条带，经过对特异性条带进行回收、纯化、克隆并测序，其特异性条带的长度分别为999bp和821bp：据此，设计并开发特异性SCAR引物，成功地将特异性RAPD标记转化为小麦条锈菌新菌系T4稳定的SCAR标记；特异性SCAR标记的碱基序列：T4SP8‑1:  5′ GGGCGTGGATGAAGAG 3′T4SP8‑2:  5′ GGAGCAGAAGCAGGTTT 3′。