液相片段缩合制备胸腺肽α1的方法

摘要

本发明提供了一种液相片段缩合制备胸腺肽α1的方法，属于生化技术领域。该方法利用高荷载量（≥0.8mmol/g树脂）的树脂为起始原料，先采用标准的固相多肽合成(SPPS)技术合成选定结构的高纯度肽片段，再采用液相缩合技术连接肽片段，从而获得高纯度(＞99%)的目标肽。相比较固相合成胸腺肽α1的工艺，本发明避免了12位以后氨基酸偶联率低的问题，大大提高了胸腺肽α1的收率（达25～30%）；同时固相合成的肽片段不必纯化，简化了后处理工艺，最终采用高效液相色谱纯化胸腺肽α1，制备难度降低，制备次数减少，胸腺肽α1的合成成本降低，有利于实现规模化、产业化生产。

主权项

一种液相片段缩合制备胸腺肽α1的方法，包括以下工艺步骤：（1）将结构为Fmoc‑EVVEEAEN‑COOH的侧链保护肽羧基端进行保护，得到结构为Fmoc‑EVVEEAEN‑Y的侧链保护肽片段，并使该肽片段的氨基端去保护，得到结构为NH2‑EVVEEAEN‑Y的侧链保护肽；（2）采用液相片段缩合方法，将侧链保护肽NH2‑EVVEEAEN‑Y与结构为Fmoc‑KEKK‑COOH的侧链保护肽反应，得结构为Fmoc‑KEKKEVVEEAEN‑Y的羧基保护的侧链保护肽；并使该肽片段的氨基端去保护，得NH2‑KEKKEVVEEAEN‑Y；（3）将Fmoc‑EITTKD‑COOH侧链保护肽与Leu‑OBzl反应得到侧链保护肽Fmoc‑EITTKDL‑OBzl，并将氨基Fmoc脱去，得到侧链保护肽NH2‑EITTKDL‑OBzl，再采用液相片段缩合法将NH2‑EITTKDL‑OBzl侧链保护肽与结构为Fmoc‑SDAAVDTSS‑COOH的侧链保护肽缩合，产生侧链保护肽Fmoc‑SDAAVDTSSEITTKDL‑OBzl；再将肽氨基末端乙酰化，得侧链保护肽Ac‑SDAAVDTSSEITTKDL‑OBzl，并脱去羧基端Bzl保护，得到Ac‑SDAAVDTSSEITTKDL‑COOH；或将侧链保护肽NH2‑EITTKDL‑OBzl与侧链保护肽Ac‑SDAAVDTSS‑COOH缩合得到侧链保护肽Ac‑SDAAVDTSSEITTKDL‑OBzl，并脱去羧基端Bzl保护，得到侧链保护肽Ac‑SDAAVDTSSEITTKDL‑COOH；（4）采用液相片段缩合方法将羧基保护的侧链保护肽NH2‑KEKKEVVEEAEN‑Y与结构为 Ac‑SDAAVDTSSEITTKDL‑COOH的侧链保护肽反应，产生结构为Ac‑SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN‑Y羧基保护的侧链保护肽；（5）将肽Ac‑SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN‑Y侧链保护肽的侧链和羧基去保护，得目标肽Ac‑SDAAVDTSSEITTKDLKEKKEVVEEAEN‑COOH；上述Y为叔丁酯基、苄酯基、对硝基苄酯基或三苯甲基。