一种温和高效破碎大肠杆菌细胞的方法

摘要

本发明公开了一种温和高效破碎大肠杆菌细胞的方法，步骤如下：大肠杆菌细胞悬浮于重悬缓冲液中，并且用10～50mMEDTA溶液于4℃处理过夜，离心收集菌体沉淀，再利用高渗缓冲液与低渗缓冲液重复处理三次，可以使大肠杆菌细胞总体破碎率达到99.2%以上。本发明细胞破碎工艺操作简便，设备要求低，易于放大生产，对大肠杆菌破碎率高，并且同时得到细胞内可溶性及不溶性成分。

主权项

一种温和高效破碎大肠杆菌细胞的方法，按照下述步骤进行：（1）配制足量重悬缓冲液、高渗缓冲液及低渗缓冲液；（2）室温下收集大肠杆菌菌液，离心收集大肠杆菌菌体，按照每克湿重的大肠杆菌菌体用125ml重悬缓冲液的比例加入重悬缓冲液，并且使菌体悬浮均匀；（3）向所得重悬菌液中按照菌液与EDTA溶液体积比为9：1～49:1的比例加入pH 8.0的0.5M EDTA溶液，至EDTA最终浓度达到10～50mM，混匀后于4℃静置过夜，8000rpm离心10min，分别收集上清液与菌体沉淀；（4）向所得菌体沉淀中按照每克沉淀用100ml高渗缓冲液的比例加入高渗缓冲液，并使菌体悬浮均匀；放置20分钟，混匀后于6000rpm离心，收集高渗缓冲液处理后所得菌体沉淀；（5）向高渗缓冲液处理所得菌体沉淀中按照每克沉淀用100ml低渗缓冲液的比例加入低渗缓冲液，并使菌体悬浮均匀；放置20分钟，混匀后于6000rpm离心，分别收集低渗缓冲液处理后所得上清液与菌体沉淀；（6）继续按照步骤4、步骤5所述用高渗缓冲液与低渗缓冲液的操作流程重复处理步骤4所得菌体沉淀2次，分别收集所得上清液与菌体沉淀；合并上述各步骤所得上清液，即得大肠杆菌细胞内的可溶性成分，沉淀中为大肠杆菌细胞内的不溶性成分。