| 摘要 |
1. Способ получения полипептида, конъюгированного с поли(этиленгликолевым) фрагментом, заключающийся в том, что осуществляют следующие стадии, на которыха) получают нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый полипептид, которая содержит в направлении 5'→3' I) нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, и II) нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 01, и полипептид-мишень, который имеет аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 02, и который ковалентно конъюгирован с поли(этиленгликолевым) фрагментом на С-концевом остатке лизина с помощью мутантной формы трипсина D189K, К60Е, N143H, Е151Н, иб) выделяют и тем самым получают полипептид, конъюгированный с одним поли(этиленгликолевым) фрагментом.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что инкубация включаетI) инкубацию слитого полипептида и пептида-мишени с гидрохлоридом гуанидиния в забуференном растворе,II) инкубацию мутантной формы трипсина D189K, К60Е, N143H, Е151Н с Zn(II)-солью,III) объединение и инкубацию смесей, указанных в подпунктах I) и II).3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что слитый полипептид кодируется нуклеиновой кислотой, которая содержит в направлении 5'→3':I) нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид,II) нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность, которая представлена в SEQ ID NO: 01, иIII) нуклеиновую кислоту, кодирующую аминокислотную последовательность, которая представлена в SEQ ID NO: 13 или SEQ ID NO: 27.4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что продолжительность инкубации составляет от 150 до 180 мин.5. Способ по п.1, отличающийся тем, что нуклеиновая кислота, указанная на стадии а), содержит такжеIII) нуклеиновую кислоту, кото |
