一种基于重组UL55蛋白的鸭瘟病毒抗体检测方法

摘要

本发明涉及动物医学领域，特别涉及用于检测鸭瘟病毒抗体的方法，具体包括固相抗原的制备、一抗结合、二抗结合、显色及检测并判定等步骤，本方法是基于纯化的重组UL55蛋白建立的间接ELISA法，其特异性好，对鸭病毒性肝炎病毒(DHV)、鸭疫里默氏菌(RA)、鸭大肠杆菌(E.coli)、鸭源沙门氏菌(Salmonella)、鸭肿头性出血症病毒和鸭源流感病毒的阳性血清进行检测，结果均为阴性；该方法的对酶标板内或板间重复试验显示变异系数均小于10％，能检出经1∶6400倍稀释的DPV弱毒疫苗免疫鸭的阳性血清。

主权项

基于重组UL55蛋白的鸭瘟病毒抗体检测方法，其特征在于，具体步骤为：a固相抗原的制备：将包被浓度为0.2mg／ml的重组UL55蛋白液固相载体连接，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗原及杂质，得固相抗原；所述固相载体为酶标板；所述的封闭液为体积浓度为1.0％的牛血清白蛋白；b一抗结合：将待检血清作160倍的稀释，得稀释血清，即一抗，通过保温反应使所述稀释血清与所述固相抗原结合形成固相抗原抗体复合物，洗涤去除固相载体上杂质；c二抗结合：将酶标二抗作2000倍的稀释，得酶标二抗稀释液，将所述酶标二抗稀释液与所述固相抗原抗体复合物结合，得抗原‑抗体‑二抗复合物；所述酶标二抗为羊抗鸭IgG‑HRP；d显色：在步骤c所得抗原‑抗体‑二抗复合物加入色原底物避光显色后，加入终止液终止反应得显色样品液；所述色原底物为四甲基联苯胺；e检测并判定：将步骤d所述显色样品液用酶标仪测OD450nm值，所述OD450nm值>0.330为阳性，所述OD450nm≤0.330则为阴性；避光显色的时间为30分钟；步骤a中所述重组UL55蛋白液、步骤b中所述稀释血清及步骤c中所述酶标二抗稀释液的加入量为等体积且大于或等于100μl。