人体脂肪干细胞快速提取方法及其专用人脂肪组织消化剂

摘要

本发明公开了一种人体脂肪干细胞快速提取方法及其专用人脂肪组织消化剂，该方法包括人脂肪组织处理、液状的脂肪离心、人体脂肪干细胞提取，该方法中用到的专用人脂肪组织消化剂包含胶原酶IV型、胰蛋白酶-EDTA复合体、抗胰蛋白酶和二甲基亚砜。本发明具有使脂肪间充质干细胞充分游离出来，同时保护细胞不受伤害的效果。

主权项

一种人体脂肪干细胞快速提取方法，包括如下步骤：人脂肪组织处理：将人脂肪组织块加入离心管中，再加入等量的生理盐水而后使用组织匀浆器处理成液状的脂肪，再将已成为液状的脂肪加入离心管中；将液状的脂肪离心：使用离心机分离离心管中的液状脂肪使之分为三层，上层即油层、中间层即脂肪层、底层即沉积层；脂肪层中人体脂肪干细胞提取：移取中间层脂肪至离心管中，加入与脂肪层相等体积的人脂肪组织消化剂混匀，该消化剂包含胶原酶IV型、胰蛋白酶‑EDTA复合体、α1抗胰蛋白酶、二甲基亚砜，然后置于恒温振荡器中振荡，接着离心分离后去浮游脂肪取上层液体；而后再向取出的上层液体中加入Dulbecco’s磷酸盐缓冲液然后离心，弃去离心后的上清液取下层沉积细胞，再使用Dulbecco’s磷酸盐缓冲液重复离心洗涤2次，下层沉积细胞即为人体脂肪干细胞；沉积层中人脂肪干细胞提取：在留有沉积层细胞的离心管中加入等体积的人脂肪组织消化剂混匀，该消化剂包含胶原酶IV型、胰蛋白酶‑EDTA复合体、α1抗胰蛋白酶、二甲基亚砜，然后置于恒温振荡器中振荡后离心机离心,其后吸除上层液体，下层沉积细胞即为人脂肪干细胞。