一种快速鉴定uORF对翻译水平影响的方法

摘要

本发明属于分子生物学领域，公开了一种快速鉴定uORF对翻译水平影响的方法。该方法包括下列步骤：对目的基因的uORF片断进行扩增，得未突变的uORF片断；以未突变的uORF片段为模板，对目的基因的uORF片断进行定点突变并扩增，得突变的uORF片断；分别将未突变的uORF片断和突变的uORF片断构建重组质粒；将上述重组质粒采用基因枪方法分别导入植物组织细胞；培养植物组织细胞，用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测，比较突变型与未突变型的相对荧光素酶活性，鉴定uORF对目的基因翻译水平的影响。该方法能够快速鉴定uORF对翻译水平影响。

主权项

一种快速鉴定uORF对翻译水平影响的方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：a.对目的基因的uORF片断进行扩增，得未突变的uORF片断；b.以未突变的uORF片段为模板，对目的基因的uORF片断进行定点突变并扩增，得突变的uORF片断；c.分别将未突变的uORF片断和突变的uORF片断构建重组质粒；d.将上述重组质粒采用基因枪方法分别导入植物组织细胞；e.培养植物组织细胞，用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测，比较突变型与未突变型的相对荧光素酶活性，鉴定uORF对目的基因翻译水平的影响，即uORF对下游开放性阅读框影响。