一种从牛蛙皮中提取未变性天然胶原的方法

摘要

本发明公开了一种从牛蛙皮中提取未变性天然胶原的方法，其特点是：处理阶段用NaOH溶液、H2O2溶液和脱脂剂处理洗净的牛蛙皮分别除去非胶原蛋白、色素和脂肪，提取阶段以乙酸溶液和乙酸-蛋白酶分别浸提得到酸溶胶原和酶溶胶原，纯化阶段利用盐多次盐析，最后透析冻干得到海绵状牛蛙皮胶原。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图表明牛蛙皮胶原含有分子量为30万、20万和10万的γ链、β链和α链，其中α链为两条，很好地保留了胶原的三股螺旋结构。提取过程中除特殊说明外操作温度均在15℃以下，得到的产品干重提取率不低于80％，色白，品质优良。

主权项

一种从牛蛙皮中提取未变性天然胶原的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：（1）原料预处理将新鲜牛蛙皮除去肌肉、脂肪、血管，洗净，挤干，切碎；加入料液比为1:20‑40，浓度为0.05‑0.2mol/L NaOH溶液处理24‑48h，维持匀速搅拌，中途换液2‑5次，将牛蛙皮取出，冲洗数次，调节pH至8‑12，加入料液比为1:5‑30，体积浓度为1%‑8%的H2O2溶液处理12‑48h，维持匀速搅拌，中途换液2‑4次，将牛蛙皮取出，冲洗数次，调节pH至6.0‑6.5，用料液比为1:10‑50，体积浓度为30%‑70%脱脂剂处理12‑24h，维持匀速搅拌，取出，冲洗，纯水浸泡过夜，挤干，备用；（2）未变性天然胶原的提取将上述预处理所得的牛蛙皮60‑100重量份用浓度为0.1‑2mol/L乙酸溶液浸提24‑48h，维持匀速搅拌，未溶解的牛蛙皮沉渣用浓度为0.1‑2mol/L乙酸溶液复提6‑24h，得到酸溶牛蛙皮胶原溶液，向牛蛙皮沉渣中继续加入浓度为0.1‑2mol/L乙酸溶液，并加入浓度为1wt%‑5wt%蛋白酶浸提24‑48h，维持匀速搅拌，得到酶溶牛蛙皮胶原溶液；（3）未变性天然胶原的纯化将上述所得到的酸溶牛蛙皮胶原溶液和酶溶牛蛙皮胶原溶液用浓度为0.6‑4mol/L盐分别盐析，在温度4℃以下，5000‑20000rpm离心10‑15分钟，沉淀用浓度为0.1‑2mol/L乙酸溶液复溶，盐析2‑4次；将得到的沉淀分别溶于浓度为0.1‑2mol/L乙酸中，以浓度为0.1‑1mol/L的乙酸溶液为透析液透析处理2‑3天，冻干，得到海绵状牛蛙皮胶原；（4）以上步骤中除特殊说明外，均在温度15℃以下进行；其中脱脂剂为异丙醇、丁醇和丙酮中的至少一种；蛋白酶为酸性蛋白酶、真菌复合酶中的至少一种；盐为氯化钠、硫酸铵、硫酸钠或硫酸镁中的任一种。