小鼠整合素蛋白LFA-1分子插入结构域muαL Id的抗体J7的筛选方法

摘要

发明公开了小鼠整合素蛋白LFA-1分子插入结构域MuαL Id的抗体J7的筛选方法，它包括以下步骤：1）将目标蛋白展示于酵母细胞表面，得到表面展示有抗原多肽的酵母细胞；2）在酵母细胞表面表达不相关蛋白，然后与噬菌体抗体库共同孵育，以除去非特异性噬菌体；3）将酵母细胞与噬菌体抗体库共同孵育，使展示于所述酵母细胞表面的抗原和展示于所述噬菌体表面的抗体之间发生特异性的相互配对，得到所述酵母细胞与所述噬菌体的特异性结合物；4）从结合物中分离得到特异性结合的抗体或其编码基因。本发明可以高效快速地筛选高度保守的MuαL Id单克隆抗体J7。

主权项

小鼠整合素蛋白LFA‑1分子插入结α构域MuαL Id的抗体J7的筛选方法，其特征在于包括以下步骤：1）将MuαL Id展示于酵母细胞EBY100表面，得到表面展示有MuαL Id抗原的酵母细胞，展示在酵母表面的蛋白结构包括MuαL Id胞外域、Myc标签和α半乳糖苷酶Aga2基因的N端到C端区域，然后用流式细胞仪检测蛋白是否表达；2）在酵母细胞EYB100表面表达不相关蛋白，然后与噬菌体抗体库共同孵育，以除去非特异性噬菌体，得到表达特异性抗体的噬菌体；3）将步骤1）得到的表面展示有MuαL Id抗原的酵母细胞与除去非特异性噬菌体后的噬菌体抗体库共同孵育，使展示于所述酵母细胞表面的抗原和展示于噬菌体表面的抗体发生特异性的相互配对，得到所述酵母细胞与所述噬菌体的特异性结合物，将所述结合物从孵育体系中分离出来；4）从步骤3）得到的结合物中分离得到与展示于酵母细胞表面的MuαL Id抗原特异性结合的噬菌体，并转入到宿主细菌Escherichia coli，提取质粒，测序；将质粒转化到细菌HB2151并表达、纯化单链抗体scFv片段，用纯化蛋白进一步检测其与表达有抗原的酵母结合力；5)将单链抗体即scFv片段转化为抗体全基因片段，即scFv‑Fc。