一种从黑果枸杞果实中分离制备花色苷单体的方法

摘要

发明涉及一种从黑果枸杞果实中分离制备花色苷单体的方法，该方法包括以下步骤：⑴原料预处理：将黑果枸杞果实去杂、水洗，得到处理后的黑果枸杞果实；⑵配制体积浓度为2%甲酸甲醇溶液；⑶将甲酸甲醇溶液加入到黑果枸杞果实中进行常温浸提，得到提取液；⑷提取液经过滤、蒸发浓缩，得到黑果枸杞花色苷浸膏；⑸大孔吸附树脂的处理；⑹将黑果枸杞花色苷浸膏复溶后上处理后的大孔吸附树脂，收集流出液；⑺流出液经减压浓缩后得到花色苷粗品；⑻将花色苷粗品注入高效半制备色谱柱中进行分离，即得纯度≥90%的花色苷单体；最后，所述花色苷单体经减压浓缩、真空冷冻干燥至恒重，即得花色苷单体成品。本发明分离效果好、耗时短、成本低。

主权项

一种从黑果枸杞果实中分离制备花色苷单体的方法，包括以下步骤：⑴原料预处理：将黑果枸杞果实挑选去杂，用水冲洗，洗去表面浮土，得到处理后的黑果枸杞果实；⑵配制体积浓度为2%甲酸甲醇溶液：将200 mL甲酸与9800 mL甲醇混合均匀即得；⑶将所述步骤⑵所得的甲酸甲醇溶液加入到所述黑果枸杞果实中，在室温避光状态下按1 g：1 ~5mL的比例进行常温浸提，提取次数为1~3次，每次12~24 h，合并得到提取液；⑷所述提取液用滤纸除去不溶物、蛋白质、多糖后，得到滤液，该滤液于旋转蒸发仪上在40~50℃进行真空蒸发浓缩至膏状，得到黑果枸杞花色苷浸膏，并回收甲醇；⑸大孔吸附树脂的处理：将D‑101大孔吸附树脂用体积浓度为95% 的甲醇浸泡 24 小时，然后用体积浓度为95% 的甲醇进行洗涤，再用去离子水清洗；将该大孔吸附树脂缓慢装入树脂柱中，再用去离子水冲洗至柱中颗粒干净，不再沉降为止，即得处理后的大孔吸附树脂；⑹将所述黑果枸杞花色苷浸膏用体积浓度为2 %的甲酸复溶后上所述处理后的大孔吸附树脂；上样后先以4~6倍柱体积的蒸馏水冲柱，然后再以3~6倍柱体积的甲醇冲柱，将花色苷类化合物解吸附，收集流出液；⑺所述流出液经减压浓缩后得到花色苷粗品，同时回收甲醇；⑻将所述花色苷粗品注入高效半制备色谱柱中，在柱温为25~40℃、流速为15~25 mL/min、进样量为200~600 mg、检测波长为525nm的条件下进行半制备色谱分离，根据出峰时间依次收集纯度较低的单体矮牵牛素‑3,5‑O‑diglucosides, 矮牵牛‑3‑O‑rutinoside (trans‑p‑coumaroyl)‑5‑O‑glucosides；然后采用高效液相色谱系统在柱温为25~40℃、流速为0.6~1.0 mL/min、进样量为10 ul、检测波长为525nm的条件下进行检测，当样品纯度低于90%时，再次采用高效半制备色谱柱进行二次分离，即得纯度≥90%的花色苷单体；最后，所述花色苷单体于旋转蒸发仪上依次经减压浓缩、真空冷冻干燥至恒重，即得花色苷单体成品。