一种分子标记快速筛选草菇杂交菌株的方法

摘要

发明涉及一种分子标记快速筛选草菇杂交菌株的方法，包括：（1）引物合成；（2）草菇菌丝培养；（3）确定单核菌株的交配型基因类型；（4）草菇杂交试验；（5）PCR扩增判断。本发明与常规形态学检测、拮抗试验和出菇试验等方法相比，具有操作简便，检测时间短，准确性高的优点，可以利用交配型基因的分子标记筛选杂交菌株，有利于草菇杂交育种工作的开展，从而加快草菇新品种的研发工作，具有良好的应用前景。

主权项

一种分子标记快速筛选草菇杂交菌株的方法，包括：（1）比较草菇单孢分离菌株交配型A位点的基因序列，分析序列的保守性，针对草菇不同的单孢分离株分别设计特异性引物并合成；其中，草菇单孢分离菌株交配型为A1或A2，A位点的基因序列分别如SEQ ID No.1所示或如SEQ ID No.2所示；A1对应的特异性引物为A1F：AGGGCATTCCAACCTATTCGCTTTC；A1R：AATGTGAACAGTTTGAGCGGAGT；A2对应的特异性引物为A2F：CACTATCTCCTTGCGTTTGTTATG；A2R：ATAACCAAACGCCAGAAACACTA；（2）将上述草菇单孢菌株接种于PDA平板培养基，32～34℃培养；挑取草菇菌丝，利用试剂盒检测菌株交配型基因类型；（3）把上述已确定交配型基因类型的草菇单孢菌株分别接种PDA平板培养基上，32～34℃下培养5～7d，在菌丝生长的部位打孔，把不同的单孢菌株两两接种在PDA平板培养基上，相距1厘米，32～34℃培养，两个菌落相交时，分别从两个菌落的外侧挑取菌块转移到PDA试管培养基上，32～34℃培养，3次继代培养；（4）采用步骤（1）中的交配型基因的特异性引物对草菇杂交获得的菌株进行PCR扩增，草菇杂交菌株能扩增出针对两个母本的交配型基因的两条条带，单孢菌株只能扩增出一条条带，即可筛选出草菇杂交菌株。