角蛋白酶的酶活检测方法

摘要

发明涉及生物酶领域，尤其涉及一种新型的角蛋白酶检测方法。角蛋白酶的检测方法，包括下述的步骤：（1）溶液配制：配制甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、乙酸-乙酸钠缓冲液、二硫苏糖醇溶液；（2）检测：取底物天青角蛋白，剪成段，使其长度小于2mm；反应，将反应体系置于60℃水浴酶解1h，酶解液5000g离心10min，取上清，分别测定样品管和空白管在595nm处的吸光值A1和A0；（3）分析方法：以样品管吸光值A1比空白管A0每上升0.1定义为一个酶活单位U，计算公式如下：X=(A1-A0)×10×n（n为酶液稀释倍数）。

主权项

角蛋白酶的酶活检测方法，包括下述的步骤：（1）溶液配制配制甘氨酸‑氢氧化钠缓冲液，使该缓冲液的浓度为0.05mol/L，pH10.5；配制方法：取甘氨酸溶液，先加水，再加入NaOH溶液调节至pH10.5，定容至100ml，室温保存两周；配制乙酸‑乙酸钠缓冲液，使该缓冲的浓度为0.01mol/L，pH5.2；配制方法：取乙酸钠溶解于纯水中，用冰醋酸调节pH5.2，定容至250ml；室温保存两周；配制二硫苏糖醇溶液，使其浓度为1mol/L；配制方法：取二硫苏糖醇固体，溶解于乙酸‑乙酸钠缓冲液中，过滤除菌后分装于1.5ml离心管中，‑20℃保存；（2）检测取底物天青角蛋白，剪成段，使其长度小于2mm；反应体系如下：天青角蛋白3mg/ml，二硫苏糖醇0.01mol/L，用甘氨酸‑氢氧化钠缓冲液将酶液稀释至1.5‑3.0U/ml，空白管不加酶液；将反应体系置于60℃水浴酶解1h，酶解液5000g离心10min，取上清，分别测定样品管和空白管在595nm处的吸光值A1和A0；（3）分析以样品管吸光值A1比空白管A0每上升0.1定义为一个酶活单位U， 计算公式如下：X=(A1‑ A0)×10×nn为酶液稀释倍数；X为角蛋白酶的酶活。