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一种灌木柳组织培养方法，其培养步骤如下： (1)选材及消毒处理：选取生长健壮、无病虫害的1～2年生灌木柳枝条，摘除老叶，置于室温下水培7天，每天换水1次，以新长出的嫩茎作为外植体，然后将所选取的外植体剪切成2～4cm长的带芽茎段，经70％的酒精消毒40s，再用0.1％的升汞消毒5分钟，最后用无菌水冲洗5次； (2)试管苗培养：在超净工作台上和无菌条件下，将步骤(1)中消毒处理后的外植体剪去接触消毒液的伤口部位，留1～2cm带芽茎段接种在含有诱导培养基的培养瓶中，然后将其置于普通日光灯为光源的环境下，光照强度为1500～2000Lx，每日光照时间为16小时，温度26±2℃，相对湿度65％～75％，培养15天，长成6～8cm的无菌试管苗； (3)增殖、生根培养：将步骤(2)中长成的试管苗，剪切成长度为1.5～2.0cm带有1～2个腋芽的茎段，转接到增殖培养基中进行增殖培养，培养条件为光照强度1500～2000Lx，每日光照时间为16小时，温度26±2℃，相对湿度65％～75％，在该培养基中同时可获得健壮的生根苗，无需专门的壮苗培养和生根培养阶段，生根率为100％，一个周期20天的繁殖倍数为4～6倍，直至达到所需要的繁殖生产规模时进入下一步骤； (4)将步骤(3)中株高达6～8cm、根系发达且叶片展开的再生植株开瓶培养2天进行炼苗，取出试管苗，洗净，移栽到含有泥炭和黄心土的基质中，其中泥炭与黄心土的体积比为1：1，然后浇透水，用塑料薄膜覆盖容器口，保持温度24～28℃，相对湿度75％～85％，适当遮荫，培养15～20天至长出的新叶完全展开后，去掉覆盖的塑料薄膜，获得灌木柳苗木，成活率达99.2％； 所述的诱导培养基为：每升WPM基本培养基+0.2mg6‑苄基腺嘌呤+0.1mg赤霉素+500mg酸水解酪蛋白+1000mg活性炭； 所述的增殖培养基为：每升WPM基本培养基+0.6mg6‑苄基腺嘌呤+0.05mg萘乙酸+500mg酸水解酪蛋白+1000mg活性炭。 |
