一种人类粒细胞抗原（HNA）1-5系统基因分型的PCR-SBT方法及试剂

摘要

本发明提供一种HNA1-5系统抗原分型的PCR-SBT方法，它包括以下步骤：制备人基因组DNA；提供扩增引物，用聚合酶链反应分别扩增HNA-1、HNA-2、HNA-3、HNA-4和HNA-5抗原系统的基因序列；将扩增产物进行双酶切纯化；提供测序引物，将纯化产物进行测序PCR反应；将测序产物进行醋酸钠-乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；将获得的序列通过软件分析，确定其基因型。本发明还提供上述方法所用的试剂。本发明通过对HNA抗原5个系统分别进行序列测序，获得HNA抗原基因分型的寡核苷酸序列，精确地对其基因进行定型。本发明对于医学研究单位、药学研究和试剂开发单位具有重要的现实意义。

主权项

一种人类粒细胞抗原（HNA）1‑5系统基因分型的PCR‑SBT方法所用的试剂，其特征在于它由用于扩增的引物和用于测序分析的寡核苷酸测序引物组成；所述用于扩增的引物为：（1）HNA‑1抗原系统的基因序列的扩增引物，HNA‑1F：5’‑TGTAAAACGACGGCCAGTGGGCCAAGATGCTCTAAGAC‑3’HNA‑1R：5’‑CAGGAAACAGCTATGACCTGGCTCTTACCAAGTATTTCAGG‑3’（2）HNA‑2抗原系统的基因序列的扩增引物，HNA‑2F：5’‑TGTAAAACGACGGCCAGTCTGSTGAAAAAGCAGAAAGAGAT‑3’HNA‑2R：5’‑CAGGAAACAGCTATGACCTAGGCTGAGAGGCTGGAAAG‑3’（3）HNA‑3抗原系统的基因序列的扩增引物，HNA‑3F：5’‑TGTAAAACGACGGCCAGTCTTTTCCCCCTGTGAATGTG‑3’HNA‑3R：5’‑CAGGAAACAGCTATGACCCATGCCCATCCTCATAGGTC‑3’（4）HNA‑4抗原系统的基因序列的扩增引物，HNA‑4F：5’‑TGTAAAACGACGGCCAGTGTTCCCACTTCTCCCCACA‑3’HNA‑4R：5’‑CAGGAAACAGCTATGACCGGACAGATATGGGCATGGTC‑3’（5）HNA‑5抗原系统的基因序列的扩增引物，HNA‑5F：5’‑TGTAAAACGACGGCCAGTTCTGATATTCCCCACCCTGA‑3’HNA‑5R：5’‑CAGGAAACAGCTATGACCACCCTAAGACCCCTGTCCAC‑3’所述2条寡核苷酸测序引物序列如下：M13F：5’‑TGTAAAACGACGGCCAGT‑3’M13R：5’‑CAGGAAACAGCTATGACC‑3’。