发酵方法

摘要

本发明提供了用于细菌类毒素的周质表达的方法，包括步骤：a)在发酵培养基中培养革兰氏阴性宿主细胞的培养物，其中所述宿主细胞用多核苷酸转化，并且其中所述多核苷酸编码细菌类毒素和周质信号序列；或提供革兰氏阴性宿主细胞，其中所述宿主细胞用多核苷酸转化，并且其中所述多核苷酸编码细菌类毒素和周质信号序列并且其中所述革兰氏阴性宿主细胞包括在周质中表达的细菌类毒素；a(i))诱导所述细菌类毒素的表达；b)使所述宿主细胞成熟，其中所述成熟步骤包括：I)使宿主细胞接受pH休克；II)无补料添加孵育所述宿主细胞；和/或III)使宿主细胞接受低于-20℃的温度；和c)从所述宿主细胞提取细菌类毒素，其中所述提取方法包括渗透压休克。

主权项

用于细菌类毒素的周质表达的方法，其包括步骤：a) 在发酵培养基中培养革兰氏阴性宿主细胞的培养物，其中所述宿主细胞用多核苷酸转化，并且其中所述多核苷酸编码细菌类毒素和周质信号序列；a(i))诱导所述细菌类毒素的表达；b) 使所述宿主细胞成熟，其中所述成熟步骤包括：I) 使宿主细胞接受pH休克；II) 无补料添加孵育所述宿主细胞；和/或III) 使宿主细胞接受低于‑20℃的温度；和c) 从所述宿主细胞提取细菌类毒素，其中所述提取方法包括渗透压休克。