一种基于SYBR Green I荧光定量的牦牛应激型HSPA1A基因组织表达谱建立

摘要

本发明公开了一种基于SYBRGreenI荧光定量方法的牦牛应激型HSPA1A基因组织表达谱建立。该表达谱建立包括了如下步骤：（1）牦牛各组织RNA的提取及cDNA合成；（2）引物设计；（3）标准曲线的建立；（4）荧光定量PCR方法的优化和建立；（4）采用建立好的方法检测牦牛应激型HSPA1A基因在各组织的表达分布；（5）采用相对定量的2–△△CT法进行数据分析，计算出HSPA1A基因各组织的相对表达量；（6）构建HSPA1A基因在牦牛不同组织中的表达谱。本发明采用SYBRGreenI荧光定量方法构建了牦牛应激型HSPA1A基因组织表达谱，该方法避免了设计、标记荧光探针和价格昂贵等问题，并且该方法检测灵敏度高，特异性强，重复性好，PCR反应结束后，可立即观察结果，不需要电泳、染色等操作，因此比采用其它方法来建立组织表达谱适用性更强。

主权项

一种检测牦牛应激型HSPA1A基因组织表达分布的SYBR Green I荧光定量PCR方法及基因组织表达谱的建立，其特征在于根据牛HSP1A、β‑actin基因序列设计特异性检测引物，利用Real‑time技术对HSP1A基因在不同组织中的表达量进行定量分析。