分离具有已知遗传元件的选择的无标记微生物

摘要

本发明涉及用于分离包含已知基因元件的微生物的方法。该方法采用了几轮的1）在几个复制物中稀释含有选择的微生物的混合培养物，2）使复制物生长，3）在至少一个复制物中检测有机体并重复1）至3）直至可以通过标准过程分离有机体。

主权项

一种用于从微生物的混合培养物中分离选择的微生物的方法，包括以下步骤：a）提供含有所述选择的微生物的微生物混合培养物，其中所述选择的微生物包含一个或多个核酸分子，其中所述核酸分子包含至少15个核酸碱基对的已知的独特连续序列，并且其中所述选择的微生物的频率小于10‑3，b）在生长培养基中连续稀释所述混合培养物以提供稀释的培养物；c）孵育所述稀释培养物以容许所述微生物生长；d）在由步骤（c）获得的所述稀释培养物中检测所述核酸分子的存在或不存在以使得能够在所述混合培养物中测定所述选择的微生物的所述频率，并且确定其中检测到所述核酸分子的最多稀释的培养物（P），以及确定其中检测不到所述核酸分子的最少稀释的培养物（N），其中P和N之间的稀释因子为D并且培养物N相对于未稀释混合培养物的总稀释因子为Dt；e）制备和孵育具有稀释Dt的复制稀释培养物；f）在由步骤（e）得到的复制稀释培养物中检测所述核酸分子的存在或不存在，其中与培养物P相比，在所述复制稀释培养物中所述选择的微生物的所述频率增加；g）选择含有所述核酸分子的复制稀释培养物并使用所述选择的培养物重复步骤（e）至（g），其中所述复制稀释培养物的所述总稀释因子（Dt）增加了所述因子D，并且其中重复步骤（e）至 （g）直到包含所述核酸分子的所述选择的微生物的所述频率大于10‑3，优选地大于10‑1；h）筛选由步骤（g）获得的复制稀释培养物的单一菌落并分离包含所述核酸分子的所述选择的微生物。