具有靶向性的免疫磁性白蛋白纳米球及制备方法

摘要

本发明公开了一种靶向性的载基因免疫磁性白蛋白纳米球及制备方法，先用去溶剂化-交联法制备载基因磁性白蛋白纳米球：将质粒与磁性纳米粒孵育30min，得到质粒/纳米粒复合物，此复合物再与牛血清白蛋白的溶液混匀，用无水乙醇滴至溶液呈胶状。离心后沉淀即为载基因磁性白蛋白纳米球。接着用异型双功能交联剂将单抗西妥昔连接至载基因磁性白蛋白纳米球表面，即得到具有靶向性的免疫磁性白蛋白纳米球。本发明制得的纳米球经免疫方法检测具有免疫特性，并在体外检测其对肺癌细胞GLC-82的靶向性，结果显示出了良好的靶向性。

主权项

一种具有靶向性的载基因免疫磁性白蛋白纳米球的制备方法，其特征在于，该方法包括下述步骤： 1）制备载基因磁性白蛋白纳米球：按照质量比30:1‑50：1称取聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4磁性纳米粒悬液与质粒survivin‑siRNA，将两者混合后孵育30分钟以上，得到聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4/survivin‑siRNA复合物；按照聚乙烯亚胺修饰的Fe3O4/survivin‑siRNA复合物与牛血清白蛋白粉质量比1：5~3：5，将前者放入牛血清白蛋白溶液中，搅拌混匀，调节pH值至9；一边搅拌，一边将乙醇缓慢滴至上述混合溶液中，直至溶液呈凝胶状，得到纳米粒溶液；按照牛血清白蛋白与25%戊二醛溶液质量体积比2mg/µl ~4mg/µl，向所述纳米粒溶液中缓慢滴加25%戊二醛溶液，磁力搅拌12~24小时，使纳米粒交联固化，制得固化的载基因磁性白蛋白纳米球溶液；将所述载基因磁性白蛋白纳米球溶液高速离心，倾去上清液，超声分散，洗涤3次以上，即得到载基因磁性白蛋白纳米球；2）采用SPDP交联法进行鼠抗人EGFR单克隆抗体与载基因磁性白蛋白微球的偶联，具体步骤如下：取鼠抗人EGFR单克隆抗体，溶于0.01~0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，以鼠抗人EGFR单克隆抗体与SPDP摩尔比1：15，将鼠抗人EGFR单克隆抗体溶液加入15~25 mmol/L的SPDP的乙醇溶液中，反应60min以上，将反应混合物用pH4~5的醋酸盐缓冲液透析，在得到的带吡啶二硫基的单克隆抗体溶液中加入二硫苏糖醇，所述二硫苏糖醇与SPDP的质量比大于100:1，搅拌30分钟以上，然后以磷酸盐缓冲液为透析液进行透析，得到带巯基的鼠抗人表皮生长因子受体的单克隆抗体溶液；将载基因磁性白蛋白纳米球悬液超声分散在PH4~5的醋酸盐溶液中，然后按照载基因磁性白蛋白纳米球与SPDP质量比为10：1~20：1，搅拌下滴加SPDP乙醇溶液，高速离心后，用Hank’s液洗涤，得到活化的磁性白蛋白纳米粒；按照活化的磁性白蛋白纳米粒与带巯基的鼠抗人表皮生长因子受体的单克隆抗体质量比为20：1~30：1，将两者的溶液混合，轻摇反应15小时以上，高速离心后，用Hank’s液洗涤，得到单克隆抗体偶联的载基因磁性白蛋白纳米球悬液，即为载基因免疫磁性白蛋白纳米球。