主权项 |
一种两栖动物非伤害性样品采集DNA提取方法,其特征在于包括步骤:(1)取活有尾目或无尾目两栖动物蹼和/或趾,剪碎后置于匀浆器中,加入匀浆液后冰浴研磨,研磨碎裂后置离心管中;(2)加入1%‑3%的β‑巯基乙醇溶液,混匀后60‑70℃水浴0.5‑1h,每隔3‑5分钟取出摇匀一次;(3)10000‑15000rpm离心3‑7min,离心后,移出上清于另一无菌离心管中,弃沉淀;(4)向上清中加入等体积的按体积比20‑30:1的氯仿:异戊醇的混合溶剂,混匀后,8000‑12000rpm离心5‑15min,取上清至另一无菌离心管中;(5)加入等体积的氯仿,混匀后8000‑12000rpm离心5‑15min,再取上清;(6)向上清中加入0.8‑1.2倍体积的2‑4M NaAC溶液,混匀后再加入1.5‑2.5倍体积预冷的无水乙醇,充分混匀后‑18℃以下放置30min以上;(7)10000‑15000rpm离心3‑7min,弃上清,所得DNA沉淀在室温下晾干;(8)用70‑80%的乙醇对DNA沉淀进行洗涤,干燥后沉淀溶于TE(是什么)中,加RNase A,37℃消化20‑40min,之后于‑20℃保存。 |