基于高通量基因测序无创检测线粒体DNA的方法

摘要

本发明提供了一种基于高通量基因测序无创检测线粒体DNA的方法，该方法步骤如下：（1）提取口腔细胞总基因组DNA；（2）设计PCR引物及体外富积扩增线粒体DNA：（3）高通量测序检测。本发明的方法实验设计严谨、实验流程简单，检测结果准确、快速、自动化程度高，可以不同程度满足科研及临床检测的需求，适用于科研和临床针对线粒体相关的突变快速检测。

主权项

一种基于高通量基因测序无创检测线粒体DNA的方法，该方法步骤如下： （1）提取口腔细胞总基因组DNA； （2）设计PCR引物及体外富积扩增线粒体DNA：设计两对PCR扩增引物，对抽提出来的总基因组DNA进行完整的线粒体DNA体外富积扩增；扩增产物的长度分别为9391bps和7287bps，此时扩增产物能够覆盖整条完整的mtDNA序列； 第一对PCR引物序列为： F70655'‑GCCATCATAGGAGGCTTCATTCAC‑3'， R164555'‑CGGAGCGAGGAGAGTAGCACTCTT‑3'， 扩增线粒体DNA的位点7065/16455区域，扩增产物长度为9391bps； 第二对PCR引物序列为： F163945'‑CCTTGACCACCATCCTCCGTGAA‑3'， R71115'‑TAGCCTGAGAATAGGGGAAATCAGT‑3' 扩增线粒体DNA的位点16394/7111，扩增产物长度为7287bps； （3）使用Ion Torrent个人化操作基因组测序仪进行高通量测序检测。