一种医疗检测用高纯度甲状旁腺激素的制备方法

摘要

一种医疗检测用高纯度甲状旁腺激素的制备方法,它包括以下步骤:A)利用基因工程技术构建含有PTH1-84基因序列的质粒载体，将该载体转化到大肠杆菌感受态中；B）挑取单菌落加入到LB培养基中扩大培养，加入氨苄青霉素，使终浓度达到45-55ug/ml；35-40℃，200-250rpm培养至OD600=0.4-0.8后加入IPTG诱导，诱导5-9小时后，离心收集菌体，8000-9000rpm，12-18min，-70—-90℃冰箱冷冻；C)菌体沉淀用20mM pH5.7的PB缓冲液重悬，重悬的菌液置冰上超声破碎；D）破碎好的菌液10000-15000rpm，3-5℃，离心0.8-1.2h，收集上清，上清用已经稀释过的甲酸进行酸处理后，10000-15000rpm，3-5℃，离心0.8-1.2h；收集好的上清用0.22um的微孔膜过滤一次，准备过强阴离子柱；E)Buffer A为20mM pH4.8的PB缓冲液，Buffer B由Buffer A加入1M/L的NaCl组成，洗脱时Buffer B的浓度范围为0-100%，洗脱流速为0.8-1.2ml/min，洗脱时间4-8h，收集具有活性的高盐洗脱峰。

主权项

一种医疗检测用高纯度甲状旁腺激素的制备方法,其特征在于该制备方法包括以下步骤:A)利用基因工程技术构建含有PTH1‑84基因序列的质粒载体，将该载体转化到大肠杆菌感受态中；B）挑取单菌落加入到LB培养基中扩大培养，加入氨苄青霉素，使终浓度达到45‑55ug/ml；35‑40℃，200‑250rpm培养至OD600=0.4‑0.8后加入IPTG诱导，诱导5‑9小时后，离心收集菌体，8000‑9000rpm，12‑18min，‑70—‑90℃冰箱冷冻；C)菌体沉淀用20mM pH5.7的PB缓冲液重悬，重悬的菌液置冰上超声破碎；D）破碎好的菌液10000‑15000rpm，3‑5℃，离心0.8‑1.2h，收集上清，上清用已经稀释过的甲酸进行酸处理后，10000‑15000rpm，3‑5℃，离心0.8‑1.2h；收集好的上清用0.22um的微孔膜过滤一次，准备过强阴离子柱；E)Buffer A为20mM pH4.8的PB缓冲液，Buffer B由Buffer A加入1M/L的NaCl组成，洗脱时Buffer B的浓度范围为0‑100%，洗脱流速为0.8‑1.2ml/min，洗脱时间4‑8h，收集具有活性的高盐洗脱峰。