传染性胰脏坏死病病毒标准样品及其制备方法

摘要

本发明公开传染性胰脏坏死病病毒标准样品及其制备方法，其属于检测用病毒样品及其制备方法技术领域，具体包括即先将传染性胰脏坏死病病毒分离株经特异性PCR方法及ELISA试验检测，通过特异序列测定分析后，进行病毒增殖和TCID50滴度测定，再通过病毒培养物加入蔗糖脱脂奶粉冻干，均匀性和稳定性测试后，进行定值即为成品。传染性胰脏坏死病病毒标准样品成品为冻干粉末状，1mL/支，安瓿瓶真空包装，其为定性样品，用于该病毒检测的质量控制、新方法研制等。对积极开展我国水生动物及其产品检测标准样品的研制，添补该测量领域的空白，具有很重要的现实意义。

主权项

一种传染性胰脏坏死病病毒标准样品的制备方法，其特征在于，制备步骤包括：a.感染IPNV‑DL病毒的组织病料稀释液接种CHSE‑214细胞获得病毒增殖液；步骤包括：将已长满单层的CHSE‑214细胞用0.05%胰酶消化，悬浮于含10%胎牛血清的M199培养基中，以1～2×106个细胞/细胞瓶分装，待细胞长至培养单层80%面积时，倒掉含10%胎牛血清的M199培养基，加入200μL步骤a中的感染IPNV‑DL病毒的组织病料稀释液的上清液，20℃感作1h，再用无血清的M199培养基清洗两次，覆盖含1%甲基纤维素、2%血清的M199维持液；20℃低温培养箱继续培养，直至细胞病变达到80%时，反复冻融3次后，4℃,10000rpm，离心10min，得上清液即为IPNV‑DL病毒增殖液；b.将步骤a中获得的病毒增殖液低温真空冷冻干燥制备成混合冻干粉；所述低温真空冷冻干燥条件：将IPNV‑DL病毒增殖液经6000rpm，离心10min去除细胞碎片后，保留上清液，在无菌操作条件下按1:1体积比和冻干保护剂混合，在‑40℃冰柜中预冻24h，在设定的冻干条件进行冻干，其中所述的设定的冻干条件为冷肼温度为‑80℃，真空度30mtorr，冻干时间24h；所述冻干保护剂为：按蔗糖：去离子水的重量体积比为5%，脱脂奶粉：去离子水的重量体积比20%配制，108℃高压灭菌15min；c.检测步骤b中获得的混合冻干粉样品均匀性、稳定性后定值并分装。