通过探测寡核苷酸切割及杂交的靶核酸序列的检测

摘要

本发明涉及在固相基质上通过POCH（PO切割及杂交）试验进行的靶核酸序列的检测。在本发明中，与靶核酸序列杂交的PO被切割，上述PO的切割利用通过与CO的杂交检测，来对靶核酸序列进行检测。在本发明中，非切割PO与在固相基质上实现固定化的CO杂交。在本发明中，便于设计PO及CO，通常，又容易实现反应条件的最优化。在本发明中，在反复切割POs的同时连续实施固相基质上的信号的检测的情况下，切割的POs的数量根据切割反应的反复数而增加，信号根据切割的POs的数量而变化。因此，靶核酸序列能够以实时方式检测。相反，在没有靶核酸序列的情况下，观察不到信号的变化。

主权项

一种在固相基质上通过POCH（PO切割及杂交）试验，从DN A或核酸混合物中检测靶核酸序列的方法，其特征在于，包括：步骤（a），将上述靶核酸序列与上游寡核苷酸及探测寡核苷酸（P O）进行杂交；上述上游寡核苷酸包含与上述靶核酸序列互补的杂交核苷酸序列；上述PO包含含有与上述靶核酸序列互补的杂交核苷酸序列的靶向部位；上述PO具有单一标记；上述上游寡核苷酸位于上述PO的上游；上述上游寡核苷酸或其延伸链诱导基于具有5’核酸酶活性的酶的上述PO的切割；步骤（b），在用于切割上述PO的条件下，将具有5’核酸酶活性的上述酶与上述步骤（a）的结果物相接触；在上述PO与上述靶核酸序列杂交的情况下，上述PO被具有5’核酸酶活性的上述酶切割而生成包含单一标记的片段；步骤（c），将在上述固相基质上实现固定化的俘获寡核苷酸（C O）与上述步骤（b）的结果物相接触而实施杂交反应；上述CO包含与上述PO杂交的核苷酸序列；上述包含单一标记的片段不与上述CO杂交，非切割PO与上述CO杂交而在形成非切割PO/CO二聚物的条件下，实施上述杂交反应；以及步骤（d），测定来自上述固相基质上的上述单一标记的信号，来检测上述PO是否发生切割；上述PO发生切割表示上述靶核酸序列存在。