ИСКУССТВЕННЫЙ ГЕН MEL-TCI-A0201, КОДИРУЮЩИЙ ПОЛИЭПИТОПНЫЙ БЕЛОК-ИММУНОГЕН MEL-TCI-A0201, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pMEL-TCI-A0201, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ ЭКСПРЕССИЮ ИСКУССТВЕННОГО ГЕНА MEL-TCI-A0201, И ИСКУССТВЕННЫЙ БЕЛОК-ИММУНОГЕН MEL-TCI-A0201, СОДЕРЖАЩИЙ МНОЖЕСТВЕННЫЕ CTL- И Th-ЭПИТОПЫ АНТИГЕНОВ МЕЛАНОМЫ

摘要

1. Искусственный ген, кодирующий полиэпитопный белок-иммуноген MEL-TCI-A0201 со свойствами антигенов меланомы, имеющий последовательность длиной 1535 п.н., представленную на фиг.3, и содержащий на 5'-конце сайт эндонуклеазы рестрикции Bmt I, последовательность Козак и на 3'-конце - сайт Hind III и три стоп кодона.2. Рекомбинантная плазмидная ДНК pMEL-TCI-A0201, имеющая размер 6952 п.н., молекулярную массу 4,5·10кДа, содержащая в соответствии с физической и генетической картой, представленной на фиг.4 целевой ген по п.1, кодирующий искусственный полиэпитопный белок MEL-TCI-A0201, находящийся под контролем промотора CMV, обеспечивающего его экспрессию в клетках млекопитающих и состоящая из следующих фрагментов:NheI-HindIII - векторного фрагмента ДНК плазмиды pcDNA3.1(-) размером 5423 п.н., содержащего промотор CMV и последовательность BGH poly A, обеспечивающие экспрессию гена MEL- TCI-A0201 в клетках млекопитающих; ген устойчивости к ампициллину (bla) и pMB1 ori, обеспечивающие селекцию и размножение целевой плазмиды в клетках бактерий Escherichiacoli;NheI-HindIII - фрагмента размером 1535 п.н., содержащего ген MEL-TCI-A0201 и последовательность Козак с инициирующим кодоном ATG, полученного путем обработки рестриктазами NheI-HindIII плазмиды pAL-TA- MEL- TCI-A0201;уникальных сайтов рестрикции: NruI-209, NheI-896, HindIII-2430, NarI-3792, SmaI-3605 и имеющая следующее положение генов:3. Искусственный белок-иммуноген MEL-TCI-A0201, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную на фиг.2, и содержащий множественные цитотоксические рестриктированные HLA-A*0201, и Т-хелперные эпитопы антигенов меланомы NY-ESO-1, MART1, MAGE-A1, MAGE-A3, MAGE-A11, MAGE-C1, объединенные с использованием спейсерных аминокислотных остатков, причем, N-конец полиэпитопа содержит сигнальны�